2025年圆环病毒基因型(5篇)

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圆环病毒基因型篇一

圆环病毒病会引起断奶后仔猪多系统衰弱综合征（pmws）及猪皮炎肾病综合征，同时还能引起母猪繁殖障碍、新生仔猪先天性震颤、增生性坏死性肺炎和肠炎等疾病，同时也是猪呼吸道病综合征的原发病原之一。

近年越来越被猪病专家重视的免疫抑制病中，圆环病毒病和猪瘟、蓝耳病相提并论。杨汉春老师2009年在学术年会上指出目前国内pvc2呈高感染率，在病死猪组织样本中检出率几乎达100%。

在实际生产中，pcv2单独感染的情况较为少见，通常为混合感染。eng等对美国101个猪场中pmws相关因素进行研究发现，pmws阳性样本中最普遍的混合感染为蓝耳病病毒（72%）、猪肺炎支原体（69%）、猪链球菌（69%）和猪流感病毒（55%）。

我国学者陈义祥等调查显示，圆环病毒2型与蓝耳病病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪流感病毒混合感染的病料占57.73%，其中与蓝耳病病毒混合感染比例最高，约51.85%。近年我国有关pcv2混合感染的调查多限于病毒病，本文主要针对病毒病的混合感染情况做了统计，结果发现pcv2与蓝耳病毒的二重感染最为严重，约50.27%，该结果与国内外报道趋势相一致。截至目前，流行病学和试验数据表明，单独的pcv2感染并不能足以引起疾病的临床表现，但并发或继发细菌或病毒感染却可使死亡率大大增加。

混合感染的普遍性可能与pcv2感染导致免疫抑制有关，感染猪血液中单核细胞增加，t细胞（主要是cd4+）和b细胞数量减少，并出现低密度的未成熟粒细胞，导致免疫抑制。由于圆环病毒发病猪细胞免疫功能显著降低，缺乏有效的免疫应答能力，必然出现严重的继发感染，如副猪嗜血杆菌、链球菌、巴氏杆菌等的侵袭。

需要说明的是，目前可导致猪群发生免疫抑制的病原主要包括猪瘟病毒、蓝耳病病毒、圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒及猪肺炎支原体等。最近研究表明，pcv2常见于肺炎支原体感染的支气管周围淋巴组织区域，且肺炎支原体可促进圆环病毒的感染。

另有研究发现，在呼吸道综合征的临床病例中常见肺炎支原体与pcv2混合感染，而不一定有蓝耳病毒或流感病毒的存在。虽未对我国pcv2和肺炎支原体混合感染调查，但该现象可能是临床上最为常见的，需要加以重视，同时针对支原体肺炎做好预防免疫。另外，在选择支原体肺炎疫苗过程中也要注意油佐剂激发pcv2复制的现象。更多请访问http:///

圆环病毒基因型篇二

猪圆环病毒2型pcr检测方法操作程序

廖荣斌，何启盖

（华中农业大学动物医学院）

一、原理

猪圆环病毒2型感染引发的仔猪断奶衰竭综合症、肾炎与皮炎、增生性肠炎以及母猪繁殖障碍。通过病原检测和病毒分离是确证本病的重要手段。猪圆环病毒分为2种，即圆环病毒1型和圆环病毒2型。前者不致病，后者可致病。猪圆环病毒2型（pcv2）的基因组大小为1768 bp或1767bp。其中，pcv2 orf2基

因与免疫保护和毒力等重要特性有关，同时，此基因与pcv1的同源性较低，通

过合理设计引物，扩增orf2，从而可检测并区分pcv2与pcv1。

pcr技术具有快速、敏感的优点，已经用于许多动物疾病病原的检测。本试验是利用我们设计的引物，通过反应条件的优化，以感染猪组织或血液为模板，扩增pcv2的orf2基因，从而作出感染的结论。

二、材料准备

1、手术器械：采样用。根据样品数量来确定。

2、微量移液器（规格：2.5l，10l，100l，200l，1000l）

3、反应引物

上游引物：cac gga tat tgt agt cct ggt；

下游引物：cgc acc ttc gga tat act gtc4、磁珠：用于吸附和分离dna4、pcr仪：东胜创新

5、电泳仪：北京六一电子设备

6、紫外检测仪：bi0-rad凝胶成像系统

7．相关溶液及配方：

1╳tae buffer（电泳缓冲液）配方：（1）称量tris：242g，na2edta.2h2o：

37.2g，置于1l的烧杯中；（2）向烧杯中加入约800ml去离子水，充分搅拌溶解；

（3）加入57.1ml的醋酸，充分搅拌；（4）加去离子水将溶液定容至1l后，室 1

温保存；（5）使用时将室温保存的该溶液稀释50倍即可使用。

扩增产物的样品缓冲液：全式金生物6╳loading buffer。

三．样品采集

感染猪或流产的胎儿的肺脏、淋巴结、脾脏和肾脏；发热期猪的抗凝血或血

清；每个样品用单独的剪刀或刀片，避免交叉污染。

样品置冷藏条件下送检。也可放冷冻保存。

四、模板的制备（dna提取）

*（注：所用dna提取试剂盒为日本toyobo产品）

1、取组织100mg（或血液100ml）以下放入1.5ml离心管中，然后加入850l的溶解吸附液，再使用匀浆器充分匀浆。

2、离心分离（10000rpm，5分钟)后，将上清液吸入新的1.5ml的离心管内。

3、加入40l磁珠，然后使用涡旋振荡器剧烈混合10分钟（注意：加入磁珠前，要把磁珠混匀）。

4、将离心管置于磁性台架上，放置30秒使磁珠聚集，然后去除上清液。

5、离心管中添加900l 洗净液，然后涡旋振荡剧烈混合5秒。

6、将离心管置于磁性台架上，放置30秒使磁珠聚集，然后去除上清液。

7、重复步骤5和6.8、离心管中添加900l 70﹪的乙醇溶液，然后涡旋振荡剧烈混合5秒。

9、将离心管置于磁性台架上，放置30秒使磁珠聚集，然后去除上清液。

10、重复步骤8和9.11、添加100l灭菌水后，剧烈震荡10分钟，使dna溶出。

12、将试管置于磁性台架上，通过放置30秒使磁珠聚集，然后将含有dna的上

清液回收至新的1.5ml离心管内，上清液即为dna模板！

13、阴阳性对照的设立：利用灭菌三蒸水和pcv2阳性病毒液（或者所保存的临

床pcv2阳性病料）与临床送检病料同步提取dna，分别作为pcv2临床检测的阴性

对照和阳性对照。

五、配置pcv2-pcr的标准反应体系（单重扩增）：

10×扩增缓冲液2.5ul

dntp混合物2ul引物（10mm）各1ul

模板dna4ul

taq dna聚合酶0.15ul

加灭菌三蒸水14.35ul

即总反应体系25ul.六、扩增

将配好样品的pcr管放入pcr仪中选择适合反应条件的程序进行扩增。退

火温度54°c。

反应条件：按如下程序进行扩增: 94℃变性5 min后,进入循环94℃

30sec,54℃ 40sec, 72℃ 45sec,35个循环后,72℃延伸10 min。

七、配置琼脂糖凝胶块

1、材料：广口瓶、琼脂糖、电泳液

2、制作步骤：

（1）、称取琼脂糖1克放入广口瓶内。

（2）、取电泳液100ml加入广口瓶，即为1﹪的琼脂糖混合液。

（3）、然后放入微波炉中加热2分钟，取出后冷却约56℃。

（4）、倒入容器中，混合液约占容器容积的1/2—2/3。

八、电泳

1、扩增结束后，每只pcr管中都加入约2.5ul的6╳loading buffer（电泳样品

缓冲液）

2、将制备好的凝胶块放入dna电泳仪内的电泳液中，胶块有孔的一侧靠近负极。

3、从滴加有电泳样品缓冲液的样品中分别取7ul注入胶块相对应的孔内。

4、注入5ul的分子量（dl mark 2000）对照。

5、电泳到凝胶块的1/2—2/3处。

九、图片观察

1、电泳结束的凝胶块放入溴乙锭（荧光物质）中浸泡10min。

2、放入成像系统中照胶。

3、结果判定（目的片段大小是494bp）如图1.******8m bp

图1.临床病猪圆环病毒pcr检测的凝胶成像图片

1：阴性对照；2：阳性对照；3—18：湖北某规模化猪场送检病料；其中3—6，8，11—12，15—16为pcv2感染阳性。其余被检病料为pcv2感染阴性，m(分子标记): dl mark 2000。

4．结果分析

（1）感染的判定：pcr结果为阳性，表明为pcv2感染；阴性表明无pcv2感染。

（2）疾病的判定：由于本病毒感染较广，pcr阳性结果需要与猪群的流行病学以及临床表现（断奶消瘦、咳嗽、体温升高、腹股沟淋巴结肿大）等结合考虑。

圆环病毒基因型篇三

猪细小病毒论文：猪细小病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型多重pcr检测方法的建立及应用

【中文摘要】猪细小病毒(porcine parvovirus,ppv)、猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,prv)、猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,pcv-2)是当前影响养猪业发展的3种重要的病原。由于ppv、prv、pcv-2单独感染或混合感染均能引起猪发病,造成母猪的繁殖障碍或(和)感染猪的免疫抑制,为其他病原的继发感染提供了便利,甚至会造成猪群中疫病的流行,使养殖效益蒙受损失。聚合酶链反应(polymerase chain reaction, pcr)具有快速、敏感、特异等优点,自发明以来在病原的特异性检测方面表现出明显的优势,在动物疫病诊断和病原检测上也得到广泛地应用,对疫病防控起到了重要的作用。由于当前养猪业中猪群中多种病原混合感染病例的增多,单一病原pcr检测方法也表现出自身的不足,需要对一种病料进行多次pcr检测,使得检测时间延长,耗费人力,成本也高。多重pcr不仅保持了普通pcr敏感性高和特异性强的优点,而且还具有一个pcr反应就同时检测多种病原,具有简便、快捷、灵敏等优点,能满足生产上同时对多种疾病进行快速诊断的要求。本研究基于前期对陕西省部分养殖企业猪群中病毒性病原的调查检测,发现常有ppv、prv和pcv-2的单纯或混合感染,为此我们拟建立ppv、prv和pcv-2检测的多重pcr方法,以期为生产中这3种病原的快速检测提供可用方法。本研究获得了以下结果:(1)根据genbank中已经发表的ppv、prv和pcv-

2的全基因序列,利用dnastar和oligo6.0软件,针对病毒的保守性基因序列,分别设计了检测引物,通过对引物浓度、退火温度、pcr组分等条件的优化建立起鉴别ppv、prv和pcv-2多重pcr方法,方法敏感性试验表明,prv、pcv-2在多重pcr反应中的敏感性到达pg级,而prv在多重pcr反应中的敏感性少了一个数量级,其最低检测量也达到了10pg级。以pcv-

1、牛病毒性腹泻病毒、猪瘟病毒、猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒、大肠埃希菌、ppv、prv、pcv-2为模板分别进行多重pcr检测,结果表明只有ppv、prv和pcv-2多重pcr及单个病毒的pcr均扩增出各自的特异性条带。(2)用建立的方法对采自陕西省部分猪场的286份病料及血样进行病毒检测,从临床健康猪全血样品中ppv、prv和pcv-2的检测结果来看,pcv-2在正常猪群中有一定比例的存在,同时在个别猪场也存在prv和pcv-2双重感染的现象;从临床患病猪病料中进行检测发现,prv和pcv-2混合感染较严重,并有ppv+prv+pcv-2三重感染发生;多重pcr检测结果与单项pcr检测结果的符合率达99%以上,说明建立的多重pcr检测方法可用于临床样品的检测,为这3种疫病的诊断提供依据。

【英文摘要】porcine parvovirus , porcine pseudorabies and porcine circovirus are three main threat to the development of swine-breeding se sigle or mixed infection of the three virus both can cause diseases which can give rise to reproductive failure or(and)immunosuppression, it provides a convenient chance for secondary infection by other pathogens

and enven causes epidemic diseases in pigs wich can lead to tremendous economic losses ,and may arise public health with rapid,specific and sensitive advantages exhibits obvious preponderance in specificit detection of infectious agents in animals since it was it is applied widely in animal disease diagnosis and pathogen detection which has made important contributions to disease prevention and present,the cases of mixed infection of pathogen are increasing,and common分子molecular detection of pathogen has show its own shortage of time consuming ,high cost and labour power when we need detect one specimen ex pcr not only preserve advantages of routine pcr,but also owns advantages of convenience shortcut and sensitiveness which meet the need of fast diagonosis for multiple diseases in found that sigle or mixed infection of ppv、prv and pcv-2 is common in the course for the survey of viral pathogen in some breeding enterprises in this we plan to establish the mutiplex pcr for detection of ppv、prv and pcv-2,in purpose for providing fast detection of the three pathogens an available method.(1)specific primers for dna viruses, namely, porcine parvovirus(ppv), pseudorabies virus(prv), porcine circovirus type 2

(pcv-2),were synthesized according to the published virus conserved gene sequence of ppv, prv and pcv-2 in genbank and used by dnastar and oligo 6.0 establish a mutiplex pcr method for the detection of ppv, prv and pcv-2 by optimizing concentration of primers,annealing temperature and component of ility test shows that the susceptibility of prv and pcv-2 reach the level of pcv-1, bovine viral diarrhea virus, classical swine fever virus, porcine reproductive and respiratory syndrome virus, porcine transmissible gastroenteritis virus, escherichia coli, ppv, prv, pcv-2 as a template for multiple pcr were detected,the results show that the only ppv, prv and pcv-2 virus in a single or multiplex pcr were amplified by their specific band.(2)the blood samples collected from 286 pig farms in shaanxi province were viral detection by this ally healthy pigs from a blood sample ppv, prv and pcv-2 test results indict that pcv-2 in normal pigs have a certain percentage of presence, meanwhile several farms also exist the phenomenon of the prv and pcv-2 dual from the clinical illness were detected compound, it was serous of prv+pcv-2 combined infection in diseased pigs,and ppv+prv+pcv-2 combined infection also were detected in diseased coincidence

rate of multiplex pcr test and single pcr test is more than 99%, illutstrating that the developed novel multiplex pcr will be a tool used for the detection of clinical samples for diagnosis reference.【关键词】猪细小病毒 伪狂犬病病毒 猪圆环病毒2型 多重pcr 【英文关键词】porcine parvovirus(ppv)pseudorabies virus(prv)porcine circovirus type 2 multiplex pcr(mpcr)【目录】猪细小病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型多重pcr检测方法的建立及应用综述12-

31摘要6-8

abstract8-9

文献

第一章 猪细小病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒

12-26

1.1 猪细小病毒

1.1.2 猪细小病毒的特性

1.1.4 ppv

1.2.1 2型检测方法研究进展12-1913-141.1.1 概述12-131.1.3 猪细小病毒病流行情况14-1

51.2 伪狂犬病病毒19-22的检测方法研究15-19概述191.2.2 伪狂犬病病毒的特性19-20

1.2.4 伪狂犬病病毒检测方法

1.3.1 概述

1.2.3 伪狂犬病流行情况2020-2222-231.3 猪圆环病毒22-261.3.2 猪圆环病毒的特性231.3.3 猪圆环病毒检测方法23-26检测上的应用26-31pcr 技术26

第二章 聚合酶链反应(pcr)技术在动物病原

2.1 pcr 技术概述26-27

2.1.1 2.2 主要的2.1.2 pcr 技术的发展26-27

pcr 技术27-31pcr(nested pcr)

2.2.1 常规pcr272.2.2 套式

2.2.4 反

2.2.3 二温式pcr27-28转录pcr(rt pcr)2828

2.2.5 反转录一复合套式聚合酶链反应

2.2.7 竞争pcr(compete

2.2.9 定量2.2.11 多

第三章 2.2.6 反向pcr28pcr)28-29pcr29

2.2.8 标记pcr(lp-pcr)292.2.10 玻片pcr(slide-pcr29-30

31试验研究31-45重pcr(multiplex pcr)猪细小病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2 型 pcr 检测方法的建立31-38313232-333.1 材料与方法31-3

33.1.1 主要试剂

3.1.3 引物设计3.1.5 pcr 反应33

3.1.7 pcr 产物3.1.2 毒株、菌株和细胞31-323.1.4 病毒dna 的提取323.1.6 pcr 反应条件的优化的测序分析333333-343434-3636

3.1.8 pcr 反应的敏感性和特异性分析

3.2.1 最佳pcr 退火温度的确定3.2 结果33-363.2.2 pcr 反应最佳引物体浓度的确定3.2.3 pcr 产物的鉴定3

43.2.4 pcr 反应的敏感性3.2.5 pcr 反应的特异性试验和重复性试验3.3 讨论36-38

第四章 ppv , prv和pcv 2多重pcr

38-4

54.1 材料与方法检测方法的建立与临床样品检测分析38-39384.1.1 主要试剂38

4.1.2 毒株、菌株、细胞38

4.1.4 多重pcr

4.2 结果4.1.3 临床样品及病料的采集反应条件的优化384.1.5 样品检测38-39

39-424.2.1 两重pcr 反应条件的优化39-40

4.2.3 样品检测41-42

参考文献46-56

4.2.2 4.3 讨致谢多重pcr 的建立40-41论42-4556-57结论

45-46作者简介57

圆环病毒基因型篇四

猪2型圆环病毒及其危害

琚春梅，陈焕春，吴斌，何启盖，曹胜波

圆环病毒是近年来兽医界广泛关注的新发现畜禽类病毒之一，具有重要的经济意义。在2000年悉尼国际猪病会议（ipvs）和1999年北京国际禽病会议（icevp）上均成为受到重视的热门话题。圆环病毒除引起畜禽机体发生原发感染甚至死亡之外，更重要的是使感染畜禽的免疫功能受到损害，结果导致机体抵抗力下降，易遭受其它病原的并发或继发感染，使病情加重，造成更大损失。这种可导致免疫抑制的病毒，由于常以亚临床感染的形式出现，常易为我们所忽视，因此更应给予特别的关注。

猪圆环病毒（porcine circovirus, pcv）是由tischer等于1974年在pk-15细胞（atcc ccl31）中发现，当时认为它是一种细胞污染物，后被证实为一种新的病毒。该病毒基因组为一环状、闭合单链dna，病毒粒子无囊膜，呈二十面体对称[1]。1995年国际病毒分类委员会（ictv）第6次病毒分类报告，将该病毒与鸡传染性贫血病毒（cav）及鹦鹉喙羽病病毒（bfdv）定名为圆环病毒科（circoviridae），最近，与bfdv dna序列相似的鸽圆环病毒（picv）亦被列入该病毒科作为一个暂定成员。目前认为pcv有两种血清型：pcv1和pcv2，其中pcv1是pk-15细胞（atcc ccl31）的一种污染物，它不引起可见的cpe，感染猪也不出现临床症状。相反，pcv2与猪的多种疾病综合征有关，特别是断奶仔猪多系统衰竭综合征（postweaning multisystemic wasting syndrome, pmws）

[2]。

1．pcv理化特性

pcv病毒粒子无囊膜、呈二十面体对称，大小17nm，pcv1在cscl中的浮密度为1.37g/cm3(tischer)或1.33-1.34g/ml(allan et al),沉降系数57s。pcv1不能凝集动物红细胞，对酸（ph3）、氯仿有抵抗力。56℃或70℃不能将其灭活，并且一般的清洁剂和消毒剂对其无效[3]。

2．流行病学

目前，有报道表明pcv1血清抗体在世界各地广泛存在，然而，对于pcv2的血清流行率、排毒方式、宿主范围、传播方式等了解的还很少。在加拿大、法国、英国进行的血清学调查表明pcv2已广泛流行。我国郎洪武等对北京、河北、山东、天津、江西、吉林、河南七省猪群进行的血清学调查表明，pcv2在我国的感染可能较普遍，且pmws抗体阳性率随猪的年龄增长而升高。由此，作者推论猪群中pcv2感染比例随着猪年龄增长而升高，这种情况与国外的报道相类似[4]。关于pcv2的排出方式还未见报道，但kenshi et al研究表明，在肠上皮可检测到pcv抗原，据此，作者推论粪便在pcv传播中可能起着重要作用。目前，已有pcv2垂直传播的报道，pcv2可引起流产，在流产胎儿病变基金项目：国家自然科学基金资助项目（30170701）

作者简介：琚春梅（1976-），女，湖北枣阳人，2000级在读硕士，主要从事病毒分子生物学和基因工程疫苗的研制工作。部位可检测到pcv2抗原，同时也从胎儿组织中分离到pcv2。用pcv2细胞培

养物感染1日龄限菌（gotobiotic）仔猪，在感染后31天，可在猪的粪便、唾液和眼拭子中检测到病毒核酸。

3．致病机理

关于pcv的致病机理尚不太清楚。rosell等报道，pcv主要在单核巨噬细

胞系统及抗原提呈细胞（apc）中复制，此外，在类似小淋巴细胞的小圆形细胞

中也可检测到pcv抗原。目前，体外试验表明，pcv在单核细胞和巨噬细胞中

复制，而不在淋巴细胞中。tomoyuki等研究发现pcv感染在淋巴器官引起的特

征性组织学病变是：淋巴细胞缺失、巨噬细胞增多及出现细胞浆内包涵体。更为

重要的是：pcv抗原和病毒粒子被限制在巨噬细胞吞噬的凋亡小体中，并且凋

亡小体中无其它病原微生物存在。这些结果表明pcv可诱导b淋巴细胞凋亡并

导致b淋巴细胞缺失和猪的免疫抑制。pcv感染引起猪免疫抑制的致病机理：

pcv直接感染分裂期细胞，包括b细胞和巨噬细胞，并通过细胞间传播直接引

起单个b细胞凋亡，不能诱导巨噬细胞凋亡或坏死。含pcv的淋巴细胞凋亡小

体在生发中心被巨噬细胞和巨细胞吞噬作为一种传染源感染其它细胞或通过淋

巴结转移，巨噬细胞吞噬凋亡细胞后，凋亡小体中的病毒粒子可自发地转染巨噬

细胞，导致新的病毒粒子的产生。淋巴器官中大量b细胞凋亡可能是pcv致病

机制之一，并且也可以用来解释pcv感染猪后b细胞为何会剧烈减少。然而，pcv是否含有类凋亡素成分尚不清楚，据推测pcv可编码一种类似凋亡素的物

质从而诱导b淋巴细胞凋亡[5]。

pcv感染引起猪的免疫抑制，从而使机体更易感其它病原。这也是pcv与

猪的许多疾病综合征有关的原因。pmws是由pcv2引起的疾病之一，该病首次

报道于加拿大（clark,1997），其后在美国、法国、西班牙、北爱尔兰、日本、我国台湾、大陆等地猪群中均有报道。allan等对断奶仔猪进行试验表明，仅用ppv

感染猪，猪无临床症状，仅有轻微病变可见。仅用pcv2感染猪，也只有轻微的或中等的pmws病变出现，而用pcv2+ppv共感染猪，则出现典型的pmws

临床症状和病变[6]。在感染两种病毒时，pcv2感染的严重性可被ppv所增强，而pcv2不能增强ppv感染的严重性，为此，allan和ellis（2000）确认pcv2

是引起pmws的原发性病毒[7]。作者也由此推论，仔猪接触不确定的可刺激免

疫系统的环境因素或感染因子与pcv2共同作用，从而促使临床疾病的发生。

pcv2感染还与其它一些疾病综和征相关，包括增生性坏死性肺炎、母猪流产及

死亡综和征[8]、猪皮炎/肾病综和征和非典型性prrsv感染有关，但在这些疾病

中pcv2起多大作用尚不清楚。

4．临床症状及病理变化

pmws通常发生于5-12周龄的仔猪，典型症状包括进行性消瘦，衰弱、呼

吸困难和淋巴结肿大，有时可见腹泻、苍白、黄疽。发病率和死亡率差异很大，急性暴发时死亡率可达15%以上。肉眼病变主要表现为淋巴结肿大、肝硬变、多

灶性粘液脓性支气管炎、间质性肺炎。主要的病理组织学变化是淋巴细胞缺失、淋巴样组织的组织细胞浸润、间质性肺炎、不同程度的肝炎和间质性肾炎。此外，在有胃肠道病变的病例，胃食管部、小肠、结肠苍白、水肿及出现非出血性溃疡，组织学病变表现为绒毛萎缩，淋巴组织细胞浸润，腺上皮细胞脱落或再生。胰脏

肉眼病变不明显，但在腺泡和管状上皮中也出现多灶性萎缩和再生，这常与淋巴

组织细胞浸润有关[3]。

以上病变表明要在同群感染猪中广泛采集病料，因为临床感染猪可能在一个

器官系统出现病变，而在其它器官不出现病变。究竟哪一器官出现病变的影响因

素仍不清楚，但这可能与继发感染有关，也可能与pcv毒力、组织嗜性、感染

时期，宿主本身遗传特点及其免疫应答不同有关[3]。

5．诊断

目前pcv诊断方法可分为两类：一类是血清学方法，主要有免疫过氧化物

酶单层试验（ipma）、间接免疫荧光（ifa）[9]，但用此法对检测结果进行分析

时应慎重，因pcv1与pcv2间有轻度的抗原交叉反应性。最近已建立一种pcv2

特异性抗体检测elisa，目前正在进行大规模的血清学调查。另一类是病原学方

法，主要包括免疫组化、原位杂交[10]、pcv2特异性抗原捕获elisa[11]、pcr-rflp、pcr方法[12]。pcr诊断方法灵敏度高，但其本身也存在问题。在实验室进行pcr诊断一定要特别慎重，避免交叉污染，在尸体剖检时，pcv2样

品或剖检器械污染也很难控制，基于上述原因，从患猪组织中扩出pcv2片段并

不一定能说明该猪患的是pcv2相关疾病，定量pcr的出现及应用将减少以上情

况的发生。

6．防制

目前还没有疫苗用于pcv2免疫预防。pcv2对普通的清洁剂和消毒剂有很

强的抵抗力。目前减少pcv感染所造成损失的最有效方法是：对疾病进行快速、准确的诊断，清除发病猪，结合良好的饲养管理。

7． pcv分子生物学

pcv1全基因组1759nt，可通过形成双链复制型dna，以滚环方式进行复制。

pcv1包含7个orfs，编码蛋白>5kd，对orf1编码蛋白分析发现它与植物微

小病毒有一定的同源性，pcv感染猪可能由植物微小病毒的过渡宿主感染脊椎

动物，继而又与其它脊椎动物感染病毒发生重组引起。pcv2全基因组1767nt或

1768nt，包括10个或11个orfs，每个orf编码蛋白从2-36kd不等。目前，已有6个orfs被鉴定。pcv1与pcv2同源性<80%，但其基因组结构相似，都

含有两个最大的开放阅读框：orf1和orf2，其中orf1变异很小，同源性为85%，主要编码与病毒复制有关的rep蛋白，orf2变异较大，其同源性约为65%，这

表明pcv的型特异性抗原表位可能在相应的orf2蛋白中[2]。根据这一推测，mahe等通过对合成肽扫描分析已经绘出orf2序列中的几个pcv型特异性抗原

表位[13]。最近，nawagitgul应用杆状病毒表达系统表达出了完整的orf2蛋白，并证实它是一种主要的结构蛋白，可自我装配成类病毒粒子[14]。liu等将orf2

基因连接到mbp-his（8）-tag基因3’-端，中表达了orf2融合蛋白，该蛋白可与pcv2多抗反应[15]。liu等用免疫荧光方法研究了pcv2 orf2在细胞

内的定位，结果表明pcv2 orf2 n端41个aa与pcv2在细胞核内定位有关，特

别是其n端12-18位aa和34-41位aa在核内定位中起着重要作用。

参考文献：（略）

圆环病毒基因型篇五

猪圆环病毒2型疫苗最新研究进展

猪圆环病毒病是公认的免疫抑制病之一，造成猪场损失惨重，疫苗免疫成了救命的稻草。从2011年猪圆环疫苗上市至今，已有17家圆环产品先后上市，目前，出现严重供大于求的现象，同时，养殖场也面临着幸福的烦恼，大量产品的上市，产品价格可能下降，但是，面对玲琅满目的产品，如何选择疫苗成了养殖场一个重要的课题，针对这些烦恼，本文希望能够为养殖场选择疫苗带来帮助，避免走弯路，为养殖场服务。

-2国内外最新流行动态

由pcv-2引发的疾病已成全球流行之势，在加拿大首次报道该病原引起pmws后[1]，学者通过调查本国包括spf猪、部分散养猪以及育肥猪发现，猪群中pcv-2血清中抗体普遍存在，但目前该病在加拿大仍然只是散发。在英国和北爱尔兰，猪群血清中pcv-2抗体阳性率分别为86％和92％。美国、法国、丹麦、意大利、西班牙、荷兰、新西兰、日本、韩国、墨西哥等国家也相继报道猪群中存在pmws。在我国猪群中pcv-2感染情况也不容乐观。2000年郎洪武等[2]在北京、河北、山东、天津、江西、吉林、河南等7省(市)的22个猪群采集了559份血清，用elisa方法检测pcv-2抗体，其阳性率高达5l％，表明我国猪群中存在pcv-2的感染。王忠田等[3]用pcr方法对我国北京、山东、河北、深圳、山西、天津、广东等省(市)的12个规模化猪场发病猪群进行猪圆环病毒2型感染的流行病学调查，结果表明猪圆环病毒2型感染情况在我国猪群中相当严重。李超等[4]在2010年对安徽省pcv-2流行病学调查，结果表明安徽省14个市(县)的pcv-2抗体阳性率平均为74.36％，表明安徽省猪群中普遍存在着pcv-2的感染。从上述报道表明pcv-2在我国猪群中广泛存在。根据流行病学调查显示，虽然猪群中pcv-2抗体阳性率较高，但很大比例的抗体阳性猪群并不表现出临床症状。pcv-2与其他多种病原混合感染较为严重，调查发现沙门氏菌、大肠杆菌等细菌性病原与pcv-2混合感染率达到了20％[5]。陕西省pcv-2与prv混合感染率是21.7％[6]。2005年陈义祥等对广西地区197份组织病料检测发现，pcv-2与prrsv、csfv、siv、prv混合感染占总病料数量的57.73％。2003年王文军等[7]对黑龙江地区pcv-2阳性猪群的病料调查发现，蓝耳病和猪瘟的阳性率也较高。

哈尔滨兽医研究所刘长明[8]在2007年采用免疫过氧化物酶单层细胞染色试验（ipma）对来自与黑龙江、吉林、河北、上海、内蒙古、云南、江西等地的健康猪群480份血清和发病猪群424份血清，抗体阳性率分别为79.2%和91.7%，表明pcv-2在猪群中感染率非常高。山东农科院畜牧兽医研究所吴家强博士检测结果也证实pcv-2防控比较糟糕，pcv-2，2010年检出率为34.66%（124/357），2011年检出率为25.59%(174/588)；2012年检出率为2

1.38%(147/683)，圆环病毒病依然严重，但有下降趋势，这个和使用圆环疫苗免疫有关系。