总结是把一定阶段内的有关情况分析研究,做出有指导性的经验方法以及结论的书面材料,它可以使我们更有效率,不妨坐下来好好写写总结吧。那么我们该如何写一篇较为完美的总结呢?以下是小编为大家收集的总结范文,仅供参考,大家一起来看看吧。
pcr室年度个人总结pcr检验科室自我小结篇一
班》心得
本人于2015年3月10至15日参加了广东省临检中心举办的临床基因扩增实验室技术人员上岗培训班。通过学习,除了取得广东省临检中心颁发的培训证书外,还极大的提高了理论和实验操作水平,现总结如下。
此次培训包括理论培训和实验操作。在理论培训课程当中,卫生部临床检验中心的李金明教授为我们详细讲解了《临床基因扩增实验室设计及质量管理体系的建立》、《临床基因扩增检验的质量保证》等内容。通过学习,了解到临床pcr实验室设计必须遵循各区独立、注意风向、因地制宜,方便工作的原则。质量管理的内涵:写你所做的,做你所写的,记录你已做的,分析你已做的。认识到临床标本的正确采集、运送、保存的重要性,是临床检验的质量保证的关键性环节,是解决涉及实验室检验的医患纠纷的方法之一。同时通过病例分析,对于临床基因扩增检验的检验前,检验中,检验后的质量控制,还有实验的结果处理和分析有了重新认识。对于实验室是否出现污染的鉴别,以及出现污染的处理措施有了深刻了解。
临床实验医学的发展现在经历了三个时代,分别是生化诊断时代,免疫诊断时代,和和现在的分子(基因)诊断时代,而现今时代的标志性技术正是pcr技术,是反映疾病本质的实验。正是有临床基因扩增检验技术在癌症等疾病的诊断方面有了多方应用,通过驱动基因的选择,为靶向治疗患者延长了生存期。为个体化诊疗中对疾病的鉴别诊断,诊治方案的设定提供重要的参考依据,同时也为治疗过程中临床对于治疗方案的调整提供依据。临床基因扩增检验技术在个体化诊疗中是不可或缺的一部分,是其重要的组成部分,具有强大的发展潜力和前景。
实验操作内容为egfr突变基因检测。实验操作过程中,通过认真学习和细致听讲带教老师的规范实验操作,了解到了实验的关键操作,纠正了平常在临床实际工作操作上的一些不良习惯,为日后规范检验操作提供了基础。通过分组亲自操做实验,分析和判断自己的实验结果,做实验记录笔记,基本掌握egfr突变基因检测。
通过为期六天的理论和实验培训,从中学习到了很多知识,掌握了严格的防污染以及污染的处理措施,了解到实验室设置的人流、物流、气流的走向设计原则,解决了日常工作中的实际问题,为日后临床基因扩增检验工作的开展打下了坚实的基础。了解到临床基因扩增检验技术的发展方向,受益匪浅。
pcr室年度个人总结pcr检验科室自我小结篇二
s design
g.避免内部形成二级结构
i.需要使用兼并引物时, 要参考密码子使用表,注意生物的偏好性,不要在3'端使用兼并引物,并使用较高的引物浓度(1um-3um)j.最好学会使用一种design 5,oligo6,dnastar, vector nti, online desgin et al.* 引物的另一个重要参数是熔解温度(tm)。这是当50%对于设定pcr退火温度是必需的。在理想状态下,退火温度足够低,以保证引物同目的序列有效退火,同时还要足够高,以减少非特异性结合。合理的退火温度从55℃到70℃。退火温度一般设定比引物的 tm低5℃。
设定tm有几种公式。有的是来源于高盐溶液中的杂交,适用于小于18碱基的引物。有的是根据gc含量估算tm。确定引物tm最可信的方法是近邻分析法。这种方法从序列一级结构和相邻碱基的特性预测引物的杂交稳定性。大部分计算机程序使用近邻分析法。
根据所使用的公式及引物序列的不同,tm会差异很大。因为大部分公式提供一个估算的tm值,所有退火温度只是一个起始点。可以通过分析几个逐步提高退火温度的反应以提高特异性。开始低于估算的tm5℃,以2℃为增量,逐步提高退火温度。较高的退火温度会减少引物二聚体和非特异性产物的形成。
定制引物的标准纯度对于大多数pcr应用是足够的。引物产量受合成化学的效率及纯化方法的影响。定制引物以干粉形式运输。最好在te重溶引物,使其最终浓度为100μm。te比去离子水好,因为水的ph经常偏酸,会引起寡核苷的水解。引物的稳定性依赖于储存条件。应将干粉和溶解的引物储存在-20℃。以大于10μm浓度溶于te的引物在-20℃可以稳定保存6个月,但在室温(15℃到30℃)仅能保存不到1周。干粉引物可以在-20℃保存至少1年,在室温(15℃到30℃)最多可以保存 2个月。ze reactants concentration iom ions mg离子的作用主要是 dntp-mg 与核酸骨架相互作用,并能影响polymerase的活性。一般 的情况下 mg的浓度在0.5-5mm之间调整。同样要记住的是在调整了dntps的浓度后要相应的调整mg离子的浓度。对实时定量pcr,使用3-5mm带有荧光探针的镁离子溶液。
b.其他的离子
start pcr
热启动pcr是除了好的引物设计之外,提高pcr特异性最重要的方法之一。尽管taq dna聚合酶的最佳延伸温度在72℃,聚合酶在室温仍然有活性。因此,在进行pcr反应配制过程中,以及在热循环刚开始,保温温度低于退火温度时会产生非特异性的产物。这些非特异性产物一旦形成,就会被有效扩增。在用于引物设计的位点因为遗传元件的定位而受限时,如site-directed突变、表达克隆或用于dna工程的遗传元件的构建和操作,热启动pcr尤为有效。限制taq dna聚合酶活性的常用方法是在冰上配制pcr反应液,并将其置于预热的pcr仪。这种方法简单便宜,但并不能完成抑制酶的活性,因此并不能完全消除非特异性产物的扩增。
热启动通过抑制一种基本成分延迟dna合成,直到pcr仪达到变性温度。包括延缓加入taq dna聚合酶,在反应体系达到90度时,pause,将温度保持在70度以上,手工加入polymerase,但这个方法 过于烦琐,尤其是对高通量应用,并容易造成污染。其他的热启动方法使用蜡防护层将一种基本成分,加入镁离子或酶,包裹起来,或者将反应成分,如模板和缓冲液,物理地隔离开。在热循环时,因蜡熔化而把各种成分释放出来并混合在一起。有很多公司提供这样的酶。
ampliwax pcr gemtaq bead hot start polymerase(promega)magnesium wax bead.象手动热启动方法一样,蜡防护层法比较烦琐,易于污染,不适用于于高通量应用。还有一种方法是使用inactive dna rase被抗体抑制失活,当变性温度超过70度时,抗体也变性了,这样polymerase又被激活了。
r pcr
l cycler
te dna preparation
除了酶,高浓度的dntp或镁离子会降低忠实性。将dntp的浓度从200μm降低到25-50μm可以增加精确度如果四种核苷的浓度不同,忠实性会受影响。进行较少的pcr循环也会有助于增加忠实性,因为增加循环数目和产物长度就会增加突变可能性。
pcr室年度个人总结pcr检验科室自我小结篇三
条件
2、检测设备必须符合标准pcr荧光实验室设置要求;荧光定量pcr仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析软件,构成pcr-dna/rna实时荧光定量检测系统。
5、必须在无菌无尘环境下进行操作
功能
能够对患者病情进行科学、准确、实时的掌控,并结合抗hbv与t细胞免疫来打破免疫耐受,阻断肝病病毒复制的疗法、有效的分解肝炎病毒,解决了乙肝病毒易变异、耐药,病毒复制模板难以治疗,人体免疫耐受状态不易打破等医学难题,能迅速消除临床症状,而且有效抑制乙肝病毒复制,明显加快e抗原、抗体的血清转换速度,杀灭血液及肝细胞内的病毒,为防止再感染提供了长期保护,有效阻断和逆转肝纤维化、肝硬化进程。
建立方法
1、建立样品准备区
这个区域专门用作样品的准备,在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施:⑴pcr产物和带有要扩增序列的dna克隆不能在这个房间操作。⑵组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理,以根据应用的需要提取dna或rna。⑶用于样品处理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。⑷dna样品应该用有专门的防护或正压活塞式移液管操作,以防止在吸取样品时有气溶胶遗留。⑸大体积样品应该用单独包装的无菌一次性移液管吸取。⑹管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生,而且管子不能用力崩开,这样会产生气溶胶。⑺任何时候都应该穿实验服和带手套,手套要经常更换,尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要专门用于样品准备间,经常清洗。
2、样品准备和rna-pcr rna-pcr的额外步骤需要额外的样品操作,这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题,反转录一步可以在样品准备区进行。在rna-pcr中应用ung以防止污染的方法也有报道。
3、建立前pcr区。
该去专门用于准备各种反应,这个区域必须保持干净,而且没有来自克隆和样品准备的污染。前pcr区必须要有试剂和准备,特别是专门用于前pcr区的正压活塞式移液管。
4、pcr实验室试剂的操作。
⑴所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(dnase和rnase)污染。⑵所有pcr试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水,用0.22μm过滤的,并且是高压灭菌。⑶在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂,在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。⑷所用试剂都应该以大体积配制,实验一下看试剂是否满意,然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。⑸所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。⑹新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。⑺样品准备和前pcr区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。
5、在前pcr区建立pcr混合物。
⑴可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分装并保存在-20℃或4℃,在实验室只涉及到扩增一种或少数几种特异序列时这样做很有用。⑵如果你的实验室使用多套引物,以致于配制包括所有试剂的单一反应混合物不够经济,可以考虑分装保存够一天的pcr成分。⑶作为一个规则,应该保存一套阴性、弱阳性和强阳性对照样品来分析样品配制和pcr前过程的效率和洁净程度。而且,你也希望通过使用一个已知的弱阳性样品来验证你的样品缓冲液以证明里面不含扩增抑制物。⑷阴性样品要与每组样品同时做,以分析是否存在样品与样品之间的污染以及是否存在pcr产物的污染,阴性对照应该包括核酸以外的所有试剂。⑸当做阳性对照时,有两个理由决定了应该使用最少数量的核酸。⑹由于必须有对照反应,对照模板的特点应该予以考虑。
6、控制污染的方法。
已设计出很有力的酶学方法用来消除一种形式的污染—使用ung,这一技术能有效地消除由pcr产物引起的污染。另一种控制污染的方法是使用紫外线,这种方法不能完全消除污染问题,但可以将污染降低几个数量级。
pcr室年度个人总结pcr检验科室自我小结篇四
不知不觉20xx年已经结束,加入xx公司或进入xx项目已经多长时间时间,在这短短长长的学习工作中,我学到了很多知识也汲取了许多经验。20xx年房地产行情虽然不是很好,但越是这样越能锻炼我们的业务能力,增加了一份人生阅历。可以说从一个对房地产“一无所知”的门外人来说,这多长的时间里收获颇多非常感谢公司的每一位领导和同仁的帮助和指导。现已能独立完成本职工作,现将今年工作做以下几方面总结。
(一)重点突破
看似简单的工作,更需要细心与耐心。从接第一个客户的电话措手不及到现在的得心应手。从盲目拓客到现在的有目标性拓客(罗列一下工作上的困难然后如何攻克的)来到这个项目的时候对于新的环境新的事物都比较陌生在公司领导的帮助下我很快了解到公司的性质及房地产市场,通过努力的学习,明白了置业顾问的真正内涵以及职责,并且深深地喜欢上了这份具有挑战性的工作,同时也意识到自己加入房地产行业的选择是对的。
(二)工作亮点
1、目标完成或超额完成多少多少。
2、良好的工作态度,热情微笑接待客户,耐心向客户介绍楼盘信息。主动给客户倒水做到细心周到服务让客户满意留下深刻印象。
3、在接待过程中能够灵活运用一些销售技巧注意观察。向领导和经验多的同事学习。在谈话中挖掘出客户心理所需,针对不同的客户给予不同的分析和讲解做到“会说话”经常性的约客户过来看房子让客户更好的了解我们楼盘的动态。加强客户购买信心做好与客户的沟通对于意向不错的客户要及时跟踪,做出几种不同的方案,便于客户考虑,使客户的选择更明确,促进进一步的销售;适当的时候逼定是使客户尽快成交。
4、积极配合营销部的所有活动,与同事团结协作乐观面对,展开市场为了扩大营销部的来访量,根据市场分析选择持续性,选择性,经常性的外出派送单页如周边反应不错的小区,市场及周边事业单位,乡镇等等不仅做到宣传同时为了提高成交量在努力进行中。
总结半年来的工作,自己的工作仍存在很多问题和不足在工作方法和技巧上有待向其他业务员和同行学习。
1)有时缺乏耐心,对于一些问题较多或说话比较冲的客户往往会针锋相对。其实对于这种客户可能采用迂回或以柔克刚的方式更加有效,所以今后要收敛脾气增加耐心使客户感觉更加贴心才会有更多信任。
2)对客户关切不够有一些客户需要销售人员的时时关切,否则他们有问题可能不会找你询问而是自己去找别人打听或自己瞎琢磨,这样我们就会对他的成交丧失主动权,所以以后我要加强与客户的联络,时时关切通过询问引出他们心中的问题,再委婉解决,这样不但可以掌握先机操控全局而且还可以增加与客户之间的感情增加带客率。
展望未来在以后的日子中我会在高素质的`基础上更要求加强自己的专业知识和专业技能。广泛地了解整个房地产市场的动态。
20xx年自己的工作思路做好以下几个方面的工作。
(一)寻找有实力客户以扩大销售渠道。
(二)自己在搞好业务的同时,计划认真学习业务知识技能及销售实战来完善自己的理论知识,力求不断提高自己的综合素质。
(三)制定学习计划,学习对于销售人员来说至关重要,因为它直接关系到一个销售人员与时俱进的步伐和业务方面的生命力。适时的根据需要调整我的学习方面来补充新的能量。
(一)营销部可以多开展有客户之间的互动,大型活动。
(二)在不影响公司利益的前提下。大量的促销,吸引来访。
转眼间,20xx年已经结束。屈指算来,从参加房地产销售工作,来到xx湖销售部,加入我们这个有着家庭一般氛围的团体到现在已经有八个多月的时间了。从20xx年x月底入职到现在,由半知半解到对销售流程有了较好的掌握,背后努力只有自己知道,当然更少不了同事们的帮助。因为是第一次接触置业顾问的工作,所以刚来的半个月,都是担任置业助理一职,一边协助同事做好销售工作,一边学习专业知识。慢慢地,对接待客户、跟踪客户、签定合同、售后工作、银行按揭等各方面都开始有了一定的认识。5月份的下半月经考核后转为实习置业顾问。开始独立一人去接待客户,在此过程中遇到过许多困难,但在主管和同事的协助下,都顺利将工作完成,从中很快得到成长。一个月后自己对于公司项目的具体情况、公司的管理模式、房地产专业知识和房产销售流程及技巧等都有了很好的掌握。因此,经公司批准于20xx年xx月底转为正式置业顾问。
但是由于受国家房地产调控政策及贷款利率等因素的影响,xx房地产市场从xx月份开始进入了销售淡季,成交量明显下降。公司楼盘8月、9月的成交量屈指可数。所以我们接待的来访客户和来电客户数量也就有限了,而且大部分改善性客户对市场的观望心理较强,刚性需求客户也说要等到12年上半年再考虑定房,不差这半年。从十月份到现在共接待各类来访客户60组左右,接听各种客户来电80人次左右。虽然来访客户较少,但我们销售人员并没有因此空闲下来,而是积极地对来访客户进行电话回访,对来电意向客户进行预约,对之前的购房业主做好售后服务。在这期间不断的学习、锻炼、提升自己的业务能力,同时也积累了一些意向较好的客户,为后来的有效成交奠定了基础。
总结、运用。与同事们真诚相待、和睦相处,学习别人的优点,宽容别人的缺点,让自己保留一个好的心态,使之快乐。在不断地接触各种客户之后,跟其他楼盘相比的过程中更能深刻地体会到我们项目的优劣势。项目吸引客户的地方主要有:交通便利、西高铁、区政府近在咫尺等大环境的发展潜力;、小区内一条贯穿南北,蜿蜒曲折的莱茵湖水系;清华双语幼儿园;高级多功能会所;风情商业街,小区的东侧有一条加宽的市政景观生态绿化带;多层准现房,而影响客户购买信心的因素有:西药厂、购物不太方便,小区附近没有重点中小学,西区的整体市政配套不齐全;项目地理位置较偏、生活不便;小区一期交房房源还没达到交房标准、路、水电、园林绿化较慢、个别网站更新速度太慢等。不过客户们也给我们项目提出了不少宝贵意见:一号楼七十多和五十多平方的户型入户门外开时遮挡楼梯出口,七十多平方和四十多平方的入户门挨的太近,进出不方便,建议向里开;样板间能不能早点装修好,空调室外机留的位置放不下机器,能不能加宽加长。
总的来说,在公司工作的这段时间里,收获很多,积累了一些经验,总结出一些心得,希望自己在20xx年把工作做的更好,保持一颗良好的心态。良好的心态是一个销售人员应该具备的最基本的素质,我们每天工作在销售一线,面对形形色色的人和物,要学会控制好自己的情绪,不能将生活中的情绪带到工作中,以一颗平稳的心态去面对工作和生活。要有一颗宽容心。人与人之间总免不了有这样或那样的矛盾,同事、朋友之间也难免有争吵、有纠葛。只要不是大的原则问题,应该与人为善,宽大为怀,学会宽以待人。要有上进心,主动去做应该做的事情。克服拖延和懒惰的习惯,把它从你的个性中除掉。以诚相待,取得客户信任,反之你所说的一切都将起到反效果。第一时间了解客户所需要的,做针对性讲解。推荐房源要有把握,了解所有的房子,包括它的优劣势。做到对客户的所有问题都有合理解释。保持客户关系,每个客户都有各种人脉,只要保证他们对项目的喜爱,他们就会将喜爱传递。确定自己的身份,我们不是在卖房子,而是顾问,以我们的专业来帮助客户。多与客户讲讲专业知识,中立的评价其他楼盘,增加客户的信任度。在销售经理的带领下,与同事团结协作,完成公司新一年的销售目标。加强自身学习,因为再好的方法与计划,也要靠强有力的执行力来完成。作为房地产的置业顾问,不仅要精通卖房业务,对周边的一些知识也必须了解,这样才能更好为客户服务,让客户感觉我们的房子无论从质量,社区环境,物业质量等较其他楼盘都更有优势。
非常感谢公司领导给我这个锻炼机会,感谢同事对我的帮助。在新的一年里自己要保持一颗良好的心态,积极的心态、向上的心态,去面对工作、面对生活,好好工作、好好生活,忠于公司,忠于顾客,忠于自己的职责,也要忠于自己的业绩,来年努力交出自己满意的成绩单。
pcr室年度个人总结pcr检验科室自我小结篇五
实验注意事项:
(1)dna处理最好用硅烷化塑料管以防粘附在管壁上,所有缓冲液吸头、离心管等用前必须高温高压处理,常规消耗用品用后作一次性处理,避免反复使用造成污染。
(2)pcr操作应戴手套并勤于更换,必要时应戴好帽子和口罩,就像做手术一样,要有“无菌观念”。
(3)成套试剂,小量分装,专一保存,防止它用。配制试剂用新器具,用后作一次性处理。(4)试剂管用前先瞬时离心(10s),使液体沉于管底,减少污染手套与加样器机会。(5)最后加模板dna,马上盖好,混匀,瞬时离心(10s),使水相与有机相分开。加入模板且忌喷雾污染,所有非即用管都应盖严。加模板dna后应更换手套。(6)实验设阳性、阴性对照。
还有诸如:移液枪用完要放到最大计量位置,防止久了弹簧失灵;防止rna酶污染标本;低温下操作,防降解;试剂有致癌致畸作用,做好个人防护;头脑中各操作步骤要清楚,不要加错试剂。
问题及解决方案汇总:
一、假阴性,扩增无条带
pcr反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及活性 ④pcr循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。
模板:①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有酶抑制剂,③模板中蛋白质没有消化除净,特别是染色体中的组蛋白,④在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚。⑤模板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时,不出现扩增带,极有可能是标本的消化处理,模板核酸提取过程出了毛病,因而要配制有效而稳定的消化处理液,其程序亦应固定不宜随意更改。
酶失活:需更换新酶,或新旧两种酶同时使用,以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。需注意的是有时忘加taq酶或溴乙锭。
引物:引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称,是pcr失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。有些批号的引物合成质量有问题,两条引物一条浓度高,一条浓度低,造成低效率的不对称扩增,对策为:①选定一个好的引物合成单位。②引物的浓度不仅要看od值,更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳,一定要有引物条带出现,而且两引物带的亮度应大体一致,如一条引物有条带,一条引物无条带,此时做pcr有可能失败,应和引物合成单位协商解决。如一条引物亮度高,一条亮度低,在稀释引物时要平衡其浓度。③引物应高浓度小量分装保存,防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分,导致引物变质降解失效。④引物设计不合理,如引物长度不 够,引物之间形成二聚体等。
mg2+浓度:mg2+离子浓度对pcr扩增效率影响很大,浓度过高可降低pcr扩增的特异性,浓度过低则影响pcr扩增产量甚至使pcr扩增失败而不出扩增条带。
反应体积的改变:通常进行pcr扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。或100ul,应用多大体积进行pcr扩增,是根据科研和临床检测不同目的而设定,在做小体积如20ul后,再做大体积时,一定要模索条件,否则容易失败。
物理原因:变性对pcr扩增来说相当重要,如变性温度低,变性时间短,极有可能出现假阴性;退火温度过低,可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低pcr扩增效率。有时还有必要用标准的温度计,检测一下扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度,这也是pcr失败的原因之一。
靶序列变异:如靶序列发生突变或缺失,影响引物与模板特异性结合,或因靶序列某段缺失使引物与模板失去互补序列,其pcr扩增是不会成功的。
二、假阳性
出现的pcr扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。
引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行pcr扩增时,扩增出的pcr产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。
靶序列或扩增产物的交叉污染:这种污染有两种原因:一是整个基因组或大片段的交叉污染,导致假阳性。这种假阳性可用以下方法解决:①操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。②除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或 器材均应高压消毒。所用离心管及样进枪头等均应一次性使用。③必要时,在加标本前,反应管和试剂用紫外线照射,以破坏存在的核酸。二是空气中的小片段核酸污染,这些小片段比靶序列短,但有一定的同源性。可互相拼接,与引物互补后,可扩增出pcr产物,而导致假阳性的产生,可用巢式pcr来减轻或消除。
三、出现非特异扩增带
pcr扩增后出现的条带与预计的大小不一致,或大或小,或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现,其原因:一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是mg2+离子浓度过高、退火温度过低,及pcr循环次数过多有关。其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有:①必要时重新设计引物。②减低酶量或调换另一来源的酶。③降低引物量,适当增加模板量,减少循环次数。④适当提高退火温度或采用两步法。
四、出现片状拖带或涂抹带
pcr扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差,dntp浓度过高,mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多引起。其对策有:①减少酶量,或调换另一来源的酶。②减少dntp的浓度。③适当降低mg2+浓度。④增加模板量,减少循环次数。
五、出现大量引物二聚体
3.模板浓度过小,适当加大模板量;
酶,引物,mg2+浓度可能过高,可降低它们的浓度;
6.所配mix中加5%的甘油或者5%的dmso,可以增强特异性;
反应体系的配制在冰上进行,最后加taq酶,pcr结束后,产物勿放置在室温下过长时间,有人认为室温下有些taq酶会将多余的引物合成为二聚体。
8.增加循环数;
六、高gc与复杂结构的模板处理
将模板置于95℃水浴锅中处理10分钟以上,然后置于冰上瞬时冷却,可大大降低二级结构对pcr的影响。
七、长片段与短片段拼接失败(定点突变)
在做定点突变时,倘若突变位点距离基因的某一侧较近(短片段200bp)时,通常拼接困难或者难以通过电泳结果直观判断是否拼接成功。此时,可在短片段的上方(突变近5’端)或下方(突变近3’端)选取一条载体通用引物与基因另一条引物pcr(控制产物大小300bp),然后再做基因拼接。确认大小无误后,再以此产物为模板,用基因首尾引物pcr即可。
八、long pcr无条带
对于5kb片段扩增,常规pcr很难得到较好的条带,建议①更换更适合于long pcr的聚合酶;②添加pcr enhancer调整体系;③设计多对引物分段扩增。
pcr增强剂(pcr enhancer):
常见的添加剂有:dmso,甘油,甲酰胺,硫酸铵,甜菜碱,bsa等,它们对pcr反应的影响虽然有所不同,但都可提高pcr的扩增效率。
:解除模板dna局部二级结构,增加引物与模板的特异性结合,使聚合酶更容易在二级结构处延伸,但是对酶活有抑制作用,且当其浓度大于10%时还会降低保真性。
2.甘油:可降低模板溶解温度(tm),提高产量,但是对酶活有抑制作用。3.甲酰胺:促进某些“引物-模板”退火,降低带有二级结构的dna的变性温度。4.硫酸铵:增加反应体系的离子强度,改变dna的变性及退火温度,调节酶活。5.甜菜碱:有利于dna双链的解开,polymerase的结合,提高pcr的效率。
pcr室年度个人总结pcr检验科室自我小结篇六
一、恪尽职守,做好分管各项工作。
在工作中,我始终保持平常的心态,正确摆正小家与大家、家庭与事业的位臵,正确处理得与失、苦与乐的关系,坚持以大局为重,以事业为重,全身心地投入到各项工作之中。一是进一步加强机关建设。年初,根据办公室主要领导的要求,重新制发了“两室”管理制度,内容包括学习、办会、接待、车辆使用等多方面的内容,坚持用制度管事,用制度规范行为,使机关运转有章可循、高效有序。二是出色地完成了各种会议活动的组织。先后牵头组织参与多场会议,其中大型会议活动30多场。每一次会议和活动,我都身先士卒,主动参与,既当指挥员,又当战斗员,提前介入,做好预案,周密安排,精心组织,没有出现任何纰漏,树立了办公室组织会议活动的品牌。三是圆满完成了各项接待活动。坚持按照接待前重方案、接待中重周到、接待后重总结的总体要求,不断提高工作标准,努力提高接待水平。充分展示了接待水平,提高了的知名度。四是以安全、节俭为重点加强了机关车辆的调度管理。同时,组织“两室”同志适时集中开展学习,定期开展机关清洁卫生大扫除,尽力为“两室”同志创造良好的学习和工作环境。
二、努力学习,不断提高自身素质。
加强学习是增强党性修养、提高工作能力的重要途径。近一年来,我始终坚持加强学习,不断积累文化知识,逐步充实自我,完善自我,超越自我。通过深入学习重要思想以及党的精神,进一步加深对社会主义的理解,树立正确人生观、价值观,坚定共产主义信念。坚持以孔繁森、郑培民等先进人物为标杆,自觉践行,努力提高工作的责任感和使命感,时常保持旺盛的斗志和良好的精神状态。同时,按照终身教育的理念,坚持学习新业务、新知识,不断拓宽视野,增长才干,增强素养,提高素质。
三、遵章守纪,切实加强自身建设。
无论身居何位,我时常告诫自己,作为一名党员干部,肩负着党的重托和人民的期望,代表着领导机关的形象,必须时刻牢记全心全意为人民服务的宗旨,时刻保持清醒的头脑,正确对待权力,堂堂正正做人,清清白白从政,扎扎实实干事。几年来,我始终认真执行上级党组织的决定,自觉服从安排,严格按共产党员的标准要求自己,坚持自重、自省、自警、自励,虽不具备腐败的条件,但常思贪欲之害,常怀律己之心。同时,严格遵守领导干部廉洁自律各项规定,按照党风廉政建设责任制的要求管好自己,管好家属,管好身边工作人员,维护党的纪律,体现自身素质。
近一年来,我虽然做了一些工作,付出了较大努力,也取得了一定成效。但与新形势、新时期的要求相比,还有很大差距,在工作和生活中还存在一些不足。在今后的工作中,我一定加强学习,积极进取,踏踏实实做人,认认真真做事,出色地完成各项工作任务。
pcr室年度个人总结pcr检验科室自我小结篇七
我是20xx年7月6日从计生委综合服务站调到城管大队的。转眼我到单位工作已经半年了。这半年是我人生旅途中的重要一程,在镇委、镇政府及城管大队的领导下,在同志们的关心支持下,紧紧围绕镇委的中心工作,以“城管为公、执法为民”为平台,开拓创新、积极进取,为城镇居民营造一个优美和谐的人居环境作出了自己的贡献。
一、自觉加强理论学习,提高个人素质
首先,自觉加强政治理论学习,提高党性修养。我是一名党员,积极参加党委和支部组织的各项学习活动,并注重自学,认真学习了马列主义毛泽东思想、“三个代表”重要思想、党的十七报告等,进一步提高了自己的理论水平与政治素质,保证了自己在思想上和党保持一致性,强化了廉洁自律的自觉性,同时,参加了党员评议活动,对照党章开展了批评与自我批评,在工作中能处处以党员的标准严格要求自己,工作以身作则,处处发挥共产党员的先锋模范作用。
其次,在业务学习方面。我虚心向单位的同事请教,通过多看多听多想多问多做,努力使自己在尽短的时间内熟悉城管工作环境和内容。同时,我还自觉学习了物权法、行政许可法等与工作相关的政策、法律常识,积累自己的业务知识。并参加了区政府组织的法律知识考试。
第三,在工作态度和勤奋敬业方面。热爱自己的本职工作,能够正确认真的对待每一项工作,工作投入,热心为大家服务,认真遵守机关工作纪律,有效利用工作时间,坚守岗位,需要加班完成工作按时加班加点,保证工作能按时完成。完成领导交办的其它临时性工作。
二、踏实肯干,努力完成好各项工作
1、完成每个月全镇的七个交流会的管理和收费工作。
每月的6、9、15、19、23、27、29日分别是雅尔塞、奈门沁、音沁三个村的交流会。我在队长的带领下,较好地完成交流会的管理和收费工作,特别是雅尔塞交流会,早6点半就到岗,克服天气原因,防止商贩占道经营,保证道路畅通。
2、完成奈门沁西瓜市场的管理工作。
我们从7月24日至9月20日,历时两个月,克服各种困难,对奈门沁西瓜市场进行全面看护,维护市场的经营秩序,清理违章占道车辆,打击投机倒把的瓜贩子,并对交易车辆进行规范化管理,全部进场买卖,保证农民的合法权益不受侵犯。特别是在8月18日区庆五十五周年之际,较好地完成了保证道路畅通的任务,为区庆献礼。
2、开展清理苞米秆子专项整治。
进入十月份以来,由于气候干燥,居民把生活用的苞米秆子都堆放到自家的房前屋后,极易造成火烧连营,具有极大的安全隐患。我们深入到各家各户,劝导他们把苞米秆子放到安全的地方。同时,对卖苞米秆子的车辆进行了整顿,设定固定地点进行交易,防止占道交易。
3、迎接“优美乡镇”的验收进行清障专项整治。
我们利用四天时间对奈门沁至雅尔塞镇的齐查公路两侧进行了清障,把公路两侧的堆放物和拴养的奶牛进行清理,并对镇内公路两侧的杂草进行清理。同时,配合区交通局对木材、建材户堆放在公路两侧的木材、建筑材料进行了清理整顿,下发了清理违章通知书,并对一些钉子户坚决予以取缔。
4、较好地完成了居委会换届选举工作。
11月15日是我镇居委会换届选举日,我们早五点就开始入户,进行居委会换届选举工作,经过一上午的努力工作,较好地完成了居委会的换届选举工作,选举过程真正做到了公平、公开、公正。
5、参加了镇党委组织的xx大精神贯彻落实报告会。
11月21日参加了镇党委组织的,区委宣讲团到我镇开展的xx大精神贯彻落实报告会。通过宣讲团对xx大精神的进一步贯彻,使我更深入地了解了xx大的重要意义。xx大是我们党继xx大以后在新世纪新阶段召开的又一次十分重要的会议。胡代表中央所作的报告,系统总结了xx大以来党的工作,回顾了近三十年来我国改革开放的实践,进一步阐述了科学发展观,对全面建设小康社会提出了新的要求,就经济建设、政治建设、文化建设、社会建设“四位一体”的中国特色社会主义事业总体布局做出了战略部署,明确了内政、外交、国防以及继续推进党的建设新的伟大工程等战略任务。结合自身的学习实际,写了心得体会,上交镇党委。
6、完成了林业资源普查工作。
林权制度改革即将开始,林业资源普查工作是基础。按照镇委、镇政府的部署,我被安排到东风村东风屯参与林业资源普查工作。我与工作队的同志一起深入到东风村,召开两委班子会议,选出党员代表和村民代表,并一起实地踏查林地,填写各种普查表格,画林业地块图和全屯林地位置图,并进行汇总,较好地完成了林业资源普查工作。
1、自觉加强学习,向理论学习,向专业知识学习,向身边的同事学习,逐步提高自己的理论水平和业务能力。
2、克服年轻气躁,做到脚踏实地,提高工作主动性,不怕多做事,不怕做小事,在点滴实践中不断完善提高自己。
3、继续提高自身政治修养,强化为人民服务的宗旨意识,努力使自己成为一名合格的城管队员。
4、转变工作作风,提高为民服务的标准和质量,树立城管新形象。
在新的一年里,我将认真贯彻落实xx大精神,学习各项政策规章制度,较好完成各项业务工作,努力使自己的思想觉悟和工作效率全面进入一个新水平。
pcr室年度个人总结pcr检验科室自我小结篇八
pcr实验室即分子生物学实验室,在医疗、科研、生物技术方面得到广泛的应用。因其在不同行业的应用各有区别,在具体设计时也有不同之处,就医疗机构的应用而言,主要使用三区或四区设计,即试剂准备区、样品提取区、扩增分析区;此类三区设计时候应用于类似荧光定量型或同类pcr分析设备,及扩增与分析过程在设备内一次完成。而四区设计在三区的基础上讲扩增分析区拆分为扩增区与分析区适用于其他类型的pcr设备及手工处理。
在pcr实验的设计上,经过多年的经验累积,已经在一些关键技术上达成了共识。因为pcr实验中所产生的dna与rna片段过于微小,以至于可以穿透高效过滤器,所以在实验室设计上已经不在强制要求设计高效净化系统,但是为了提高实验环境水平及保护实验室内的敖贵设备方面,如果在具备条件的情况下可考虑追加高效空气净化系统;建议净化级别万级。在pcr实验中所产生的dna与rna片段污染是一直以来pcr实验的重点问题。此类污染主要至上次试验中所产生的基因片段对下次试验产生的污染,而且一旦试验环境中的污染形成后很难处理。因为消毒等传统方式对于基因污染没有很良好的效果。所以在pcr实验室设计中一般将整套实验室设计为全新风型实验室,这样而已通过有效的换气次数来达到净化室内污染的作用。而在控制方面也有很多不同之处,因为各单位对pcr实验的重视程度各有不同,所以在设计上也有不同,主要的控制设计有定送定排式压力控制系统、变送定排式压力控制系统变送变排式压力控制系统。在控制设备方面也有很多区分如压力无关型控制系统、压力有关型控制系统。
每个房间可分别控制,使用时通过房间开关输出启动信号,当设备接到启动信号时设备运行,运行中根据管道压力反馈决定变频器大小,房间内送排风量由压力无关型风量调节阀控制。 当有多个房间开启或关闭时,设备更加管道压力反馈,调节设备变频器增加或减少送排风量来稳定管道压力。各房间内压力又房间内的压力无关型定风量阀进行控制。
当bsc(生物安全柜,b2全排)开启时bsc专用供风机组运行,bsc-供风机-排风机连锁运转。
当bsc做变风量调节时,根据房间内压力变化,bsc专用供风机组前安装的压力无关型变风量调节阀根据压力变化增减送风量,确保房间压力执行在可控范围内。
当房间不适用时,房间与缓冲间均关闭电动密闭阀,确保房间处在密闭状态避免布朗运动造成的可能污染风险。
房间换气次数均按照一定净化标准设计,当室内污染发生时,通过一定时间的换气处理后,污染问题可以基本解决。 本系统如果业主需要,可在室内送风口末端加装高效过滤设备,房间可升级为净化型实验室。
压力无关型风阀简介:压力无关型风阀的特点是不会根据管道压力的变化而影响风阀内部的送风量,在一定管道压力区间内能够自行调节阀体阻力,来稳定送风量,是高端实验室必备的关键部件,目前此类阀体技术均有国外生产厂家控制,目前国内主用使用的产品有妥思、文丘里、西门子等品牌。
pcr室年度个人总结pcr检验科室自我小结篇九
20xx,这是我工作初始的一年。在这一年里,我完成了一个由高校毕业生到企业员工角色的转变。回顾这段时间的成长,收获颇多,自己的心态不断调整、成熟,为人处事的能力,各方面都在不断的成长变强。
记得刚进公司的那会,不知道自己该干什么,师父交代的活儿干完了就不知道干啥了,脑子一片空白。每天下线、压端子、分线,原来这就是工作。心里很不是滋味,学校学的知识一点都不能学以致用,很迷茫。随着时间的推移,我发现下线布线虽然看起来枯燥、平淡,把工作完成是极容易的事儿,但要做的快,做的好,且不出项点,却是件非常不容易的事。
于是,我慢慢的调整好自己的心态去重新审视这个小集体,也渐渐的明白,其实各个岗位都有发展才能、增长见识的机会,只要我们满怀着一颗热忱的心,最平凡的岗位也可以做出最不平凡的业绩。
无规矩不成方圆。工作中,我严格遵守公司班组的各项规章制度,不迟到、早退,不懂就问,把自己本职工作内的事情做到最好。即使是最基础的工作,也不断地创新求进。
职业生涯是学生生涯的一种延续。进入社会的这个大集体后,我仍发现自己在许多方面的知识缺乏。三人行则必有我师,原来社会这个大集体是如此的粉彩多呈,没有什么知识是学的完的。
学如逆水行舟,不进则退。为了让自己的知识底蕴更上一个台阶,也为了职业生涯能有更好的发展,我激励自己自考学习,用更强的知识来武装自己。
象牙塔中的生活,我们天真的活在一种自以为的骄傲中,以为自己已经无与伦比。
工作后才真正明白,如果只是一个人,永远都成全不了最优秀的团队。谁都不可能建座孤岛,一个人要取得成功,必须与他人一道工作并得到别人的合作。
这个过程,除了技术,便是处事为人的能力,不是狡诈,是尊重聆听,真心换真心的过程。我们的集体和谐融洽,我们的工作氛围轻松,大家都毫不吝啬的交流传授经验,我们的团队凝聚力强了,我们的工作效率便越来越好。
今年,是我职业生涯的第一个丰收之年,无论是在行为、思维上都切身感受到了提升和进步,更加清楚的知道自己的优势与不足,也下定决心去学习职业生涯中必备的更多的能力和技巧,我会在此基础上不断的调整学习。
新的一年即将开始,相信,在未来的工作之路道路上有全新的收获和精彩,come on !

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