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pcr防止污染 pcr污染处理方法篇一
1、《中华人民共和国环境保护法》；
2、《中华人民共和国固体废物污染环境防治法》；
3、《中华人民共和国大气污染防治法》；
4、《中华人民共和国环境影响评价法》
一
扬尘防止措施
1.建筑施工扬尘已成为城市大气污染主要源头之一，为了控制施工现场扬尘污染环境，结合工地的实际情况，特制定施工现场控制扬尘污染实施方案。
2.项目部建立以项目经理为第一责任人的环境保护体系，明确体系中各岗位的职责权限，规定相应的工作程序，对所有参与体系的人员进行必要的培训。
3建立并执行施工现场环境保护检查、奖罚制度。定期或不定期的对工地组织抽查。对成绩突出的应根据奖罚制度进行奖励，对表现较差的单位或个人应给予处罚或批评。
4工地脚手架外侧、物料提升机外侧必须用密目式安全网封闭，封闭高度要高出作业面1.5米以上并定期清洗保洁。
5施工现场出入口地面实行硬化，场内道路和作业场地按规定进行硬化处理。
6水泥和其他易飞扬、细颗粒散体材料，安排在库内存放或严密遮盖，运输时要防止遗洒、飞扬，卸运时采取码放措施，减少污染。
7建筑材料、构件、料具应按照施工总平面布置划定的区域内堆放，水泥、石灰粉必须在库房存放或严密遮盖，砂、石等散体建筑材料和土方要采取表面固化、覆盖等防扬尘措施。多余土方及时清运出场。
8施工现场建立保洁制度，有专人负责保洁工作，做到工完场地清，配备洒水设备及时洒水清扫，喷淋压尘、降尘。
9严禁在施工现场排放有毒烟尘和气体，不得在施工现场熔融沥青，应符合环保要求。
10施工现场设置垃圾站存放施工垃圾，施工垃圾按照有关市容和环境卫生的管理规定及时清运到指定地点 清理高空建筑施工垃圾，采用容器吊运，严禁凌空抛洒，清理垃圾过程中适量洒水降尘。
12工地出入口设置车辆冲洗、排水设施。驶入建筑工地的运输车辆必须车身整洁，不得污染道路，运输车辆经冲洗干净后驶出建筑工地，必须有遮盖和防护措施，防止建筑材料、垃圾和尘土飞扬、洒落和流溢。
13出现四级以上的大风天气时禁止进行土方和拆除工程施工。在大风天气，采取喷水等措施控制现场的扬尘
14现场设计排水网络，废水、雨水、生活污水经沉淀后排入城市排水系统。
15工地因特殊情况停工应及时整理，并做出必要的覆盖。
16进场后及时与当地环保主管部门进行联系，办理有关手续，在主管部门的监督、指导下，开展环保工作。17严格按照公司的环境/职业健康安全管理体系文件标准要求，结合现场实际有针对性的开展扬尘治理工作。
18现场土方、砂堆、石灰堆放扬尘控制措施：采取覆盖、表面临时固化、及时淋水扬尘。
19在土或材料的运输过程中，防止材料溅落及空气污染。
20各进出施工场地的车辆车轮在进入施工现场及离场前保持清洁。21保持施工现场出入口处主要道路的环境卫生。
22水泥搬运扬尘的控制措施：往搅拌机中倒水泥时轻拿轻放，及时覆盖及清理。
二、防污染保护措施
施工中如何做好环保工作，保护好水环境和大气环境，减小噪音，保证附近居民正常生活至关重要，依据我公司的环境方针：“守法利民，预防污染，缔造绿色家园；节能降耗，持续改进，优化周围环境。”具体措施如下：
1、水环境保护措施
（1）施工废水、生活污水按有关要求进行处理，不得直接排入下水管道。
（2）施工机械的废油废水，采用隔油池等有效措施加以处理，不得超标排放。
（3）生活污水采取二级生化或化粪池等措施进行净化处理，经检查符合标准后方准排放。
2、固体废弃物处理（1）施工营地和施工现场的生活垃圾，应集中堆放。
（2）施工和生活中的废弃物可经当地环保部门同意后，运至指定地点，此外，工地设置封闭式厕所，派专门的人员清理打扫，并定期对周围喷药消毒，以防蚊蝇滋生，病毒传播。
（3）报废材料或施工中返工的挖除材料立即运出现场并进行处理。对于施工中废弃的零碎配件，边角料、水泥袋、包装箱等及时收集清理并搞好现场卫生，以保护自然环境与景观不受破坏。
三、文明施工措施：
我公司将严格按照“集中施工、快速施工、文明施工”的十二字方针和建设部规定的建筑施工现场“三清、六好”的要求，总结我单位在其它类似工程施工中取得的经验，精心组织、合理安排，文明施工。
1、对进场施工的队伍签订文明施工协议，建立健全岗位责任制，把文明施工责任落到实处，提高全体施工人员文明施工自觉性与责任性
2、挂牌施工，标明工程项目名称、范围、开竣工期限、工地负责人，设立监督电话、接受社会监督。
3、采用有效措施处理生产，生活废水，不得超标排放，并确保施工现场无积水现象。在多雨季节应配备应急的抽水设备与突击人员。
4、施工内业资料齐全、整洁、数据可靠，办公室内按要求布置各类图表，及时反映现场状况及工程进度状况。
5、现场布局合理，材料、物品、机具、土方堆放符合要求。
6、加强夜间的安全保卫工作，设夜间巡逻。
7、创建美好环境。在工地现场和生活区设置足够的临时卫生设施，每天清扫处理，同时，在生活区周围种植花草、美化环境。8生活垃圾要集中堆放，统一搬运至指定地点废弃。
8、生活垃圾要集中堆放，统一搬运至指定地点废弃
9、施工期间，经常对施工机械车辆道路进行维修，确保道路晴雨畅通。
10、车辆在运料过程中，对易飞扬的物料用篷布覆盖严密，且装料适中，不得超限；车辆轮胎及车外用水冲洗干净，保持道路的清洁。
11、认真进行现场调查，以避免破坏地下设施。在施工中发现文物时及时报告并做好现场保护工作。
12、工地内木工加工间、易燃易爆仓库严禁烟火，操作人员必须持证上岗，乙炔和氧气瓶使用时其间距在5米以上，存放时必须封闭隔离木工加工间、仓库、宿舍、伙房以及木料堆放场等场所，配备足灭火器材。
pcr防止污染 pcr污染处理方法篇二
防噪音、防尘、防污染措施
一、为防止噪声污染，采取如下具体措施：
1、施工现场提倡文明施工，建立健全控制人为噪声的管理制度，尽量避免人为地大声喧哗，增强全体施工人员防噪声扰民的自觉意识。采取先进的联系方式，避免如吹口哨的噪声污染。
2、定期对施工作业人员进行文明施工的教育，对施工生产有关管理人员(包括各班组施工负责人)定期进行文明施工现场对噪声控制要求的考核。
3、浇筑混凝土时尽量安排在6：00～22：00进行，结构施工阶段噪声昼间控制在70分贝以下，夜间控制在55分贝以下，并且经常测试。特殊情况须在夜间施工时，一方面要尽量采取降噪措施，另一方面要做好周围居民工作，最大限度的减少扰民。
4、对强噪声机械如电锯电刨等，使用时须在封闭工棚内，尽量选用低噪声或备有消声降噪设备的施工机械；对使用时不能封闭的机械如振捣棒等，严格控制工作时间。
5、建筑物四周挂密目式安全网。
6、施工期间，尤其是夜间施工尽量减少撞击声、哨声，禁止乱扔模板、拖铁器及禁止大声喧哗等人为噪声。
7、每月进行两次噪声值监测，并在夜间22：00以后进行抽测，监测方法执行《建筑施工场界噪声测量方法》(gbl2524—90)。
8、加强噪声监测，采取专人监测、专人管理的原则，及时对施工现场超标的有关因素进行调整，达到施工噪声不扰民的目的。
9、会同有关部门和领导及时妥善处理重大扰民问题，详细记录问题及处理结果，必要时及时上报监理和甲方。
10、严格执行<中华人民共和国建筑施工场界噪声限值》(gb13—12523—90)制定的降噪声制度。在施工过程中实施以下措施，以防止噪声污染。
11、人为噪声控制：
(1)提倡文明施工，建立健全控制人为噪声污染的管理制度，增强全体施工人员的环保意识，提高防止噪声扰民的自觉性，减少人为噪声污染。
(2)在施工现场以及宿舍，严禁大声喧哗吵闹、高声歌唱或敲击工具、餐具等。(3)作业中搬运物件，必须轻拿轻放，严禁抛掷物件而造成噪声。
(4)信号指挥人员在晚22时后，早上6时前，如有起重作业，只可使用对讲机，不得用哨子指挥吊运作业。
12、严格控制作业时间
(1)作业时间控制在晚间作业不得超过22时，早晨作业不得早于6时。
(2)特殊情况需连续作业(或晚间作业)的，则应采取有效的降噪措施、并事先做好周围群众的工作，同时报工地所在地环保局备案后再施工。
13、强噪声机械的降噪措施
(1)对施工现场内的强噪声机械实行封闭式作业，即对电锯、电刨、砂轮机、切割机等设备搭设封闭式机械棚，在搭设封闭棚条件不足时，禁止夜间施工。以减少强噪声的扩散。并同混凝土运输单位洽商，混凝土车进入现场后禁止大油门轰转。
(2)浇混凝土用的振捣棒，由专业人员操作，不得在振捣作业中撬动钢筋或模板，以防止发出强噪声而污染环境、扰民。
(3)加强施工现场的噪声监测：按《建筑施工场界噪声测量方法》(gb-12524)实施长期监测，专人监测，专人管理，发现有超过施工场界噪声限值标准的，立即对现场超标因素进行整改，真正达到施工噪声不扰民的目的。
二、为防止水污染，现场采取如下具体措施：
1、施工现场道路平整，做到不积水。
2、对现场油料集中保管，油料库做好防渗、污、跑、冒、滴、漏处理。
3、搅拌机和运输车辆冲洗污水、地泵池污水等须设二级沉淀池后，排入市政污水管线或回收供洒水降尘用。
4、现场内职工食堂污水经过滤、沉淀、隔油后排入污水管线。
5、做好施工现场环境保护的监督检查工作，每月初、月中和月末对环境各项工作进行一次检查，对存在的问题及时解决，并做好文字记录和存档工作。
6、实行分类管理：
(1)现场储存、使用的化学品(油漆、涂料)和含有化学成分的其他材料，控制泄漏、遗洒挥发。
(2)对油料、油漆、稀料、冷底子油、模板油、脱模剂、压缩气体、液化气体：易燃液体、易爆固体、自燃物品、氧化剂、有机过氧化物等材料严格进行采购、运输、存放、发放和使用控制管理。
(3)如发生大面积的遗洒、燃烧、爆炸等事故，按照《应急准备与响应程序》的预案实施应急处理。
7、施工现场环保工作管理细则
8、施工过程做到落地清减少废弃物的产生。
9、对废弃物进行分类收集、区别处置的方法。固体废弃物应严格分类，按划分的相应贮存区域和贮存方式，整齐合理堆放，并有明确标识。
10、有毒、有害废弃物单独放置在密闭容器或对其进行全封闭，并注明“有害”字样。
11、木材等木作工程现场可再次利用的无毒无害废弃物，可就地回收使用；钢筋、包装容器等木作工程现场不能再次利用的可回收无毒无害废弃物，应向项目部报批后处理。
12、可回收有毒有害废弃物，项目部报批后处理。如废油桶、废塑料布、废灭火器等向公司经项目部处理并有记录。
13、对不可回收利用的无毒无害废弃物，项目部处理。
14、对不可回收利用的有毒有害废弃物，应根据国家法规，采用密闭容器存放，防止二次污染。
15、生活废弃物经由项目部和清运处置单位协商后进行处理。
pcr防止污染 pcr污染处理方法篇三
防噪音、防尘、防污染措施
云南昆钢机械设备制造建安工程有限公司第十六直属项目部
206年5月1日
防噪音、防尘、防污染措施
一、为防止噪声污染，采取如下具体措施：
1、施工现场提倡文明施工，建立健全控制人为噪声的管理制度，尽量避免人为地大声喧哗，增强全体施工人员防噪声扰民的自觉意识。采取先进的联系方式，避免如吹口哨的噪声污染。
2、定期对施工作业人员进行文明施工的教育，对施工生产有关管理人员(包括各班组施工负责人)定期进行文明施工现场对噪声控制要求的考核。
3、浇筑混凝土时尽量安排在6：00～22：00进行，结构施工阶段噪声昼间控制在70分贝以下，夜间控制在55分贝以下，并且经常测试。特殊情况须在夜间施工时，一方面要尽量采取降噪措施，另一方面要做好周围居民工作，最大限度的减少扰民。
4、对强噪声机械如电锯电刨等，使用时须在封闭工棚内，尽量选用低噪声或备有消声降噪设备的施工机械；对使用时不能封闭的机械如振捣棒等，严格控制工作时间。
5、建筑物四周挂密目式安全网。
6、施工期间，尤其是夜间施工尽量减少撞击声、哨声，禁止乱扔模板、拖铁器及禁止大声喧哗等人为噪声。
7、每月进行两次噪声值监测，并在夜间22：00以后进行抽测，监测方法执行《建筑施工场界噪声测量方法》(gbl2524—90)。
8、加强噪声监测，采取专人监测、专人管理的原则，及时对施工现场超标的有关因素进行调整，达到施工噪声不扰民的目的。
9、会同有关部门和领导及时妥善处理重大扰民问题，详细记录问题及处理结果，必要时及时上报监理和甲方。
10、严格执行<中华人民共和国建筑施工场界噪声限值》(gb13—12523—90)制定的降噪声制度。在施工过程中实施以下措施，以防止噪声污染。
11、人为噪声控制：
(1)提倡文明施工，建立健全控制人为噪声污染的管理制度，增强全体施工人员的环保意识，提高防止噪声扰民的自觉性，减少人为噪声污染。
(2)在施工现场以及宿舍，严禁大声喧哗吵闹、高声歌唱或敲击工具、餐具等。(3)作业中搬运物件，必须轻拿轻放，严禁抛掷物件而造成噪声。
(4)信号指挥人员在晚22时后，早上6时前，如有起重作业，只可使用对讲机，不得用哨子指挥吊运作业。
12、严格控制作业时间
(1)作业时间控制在晚间作业不得超过22时，早晨作业不得早于6时。
(2)特殊情况需连续作业(或晚间作业)的，则应采取有效的降噪措施、并事先做好周围群众的工作，同时报工地所在地环保局备案后再施工。
13、强噪声机械的降噪措施
(1)对施工现场内的强噪声机械实行封闭式作业，即对电锯、电刨、砂轮机、切割机等设备搭设封闭式机械棚，在搭设封闭棚条件不足时，禁止夜间施工。以减少强噪声的扩散。并同混凝土运输单位洽商，混凝土车进入现场后禁止大油门轰转。
(2)浇混凝土用的振捣棒，由专业人员操作，不得在振捣作业中撬动钢筋或模板，以防止发出强噪声而污染环境、扰民。
(3)加强施工现场的噪声监测：按《建筑施工场界噪声测量方法》(gb-12524)实施长期监测，专人监测，专人管理，发现有超过施工场界噪声限值标准的，立即对现场超标因素进行整改，真正达到施工噪声不扰民的目的。
二、为防止水污染，现场采取如下具体措施：
1、施工现场道路平整，做到不积水。
2、对现场油料集中保管，油料库做好防渗、污、跑、冒、滴、漏处理。
3、搅拌机和运输车辆冲洗污水、地泵池污水等须设二级沉淀池后，排入市政污水管线或回收供洒水降尘用。
4、现场内职工食堂污水经过滤、沉淀、隔油后排入污水管线。
5、做好施工现场环境保护的监督检查工作，每月初、月中和月末对环境各项工作进行一次检查，对存在的问题及时解决，并做好文字记录和存档工作。
6、实行分类管理：
(1)现场储存、使用的化学品(油漆、涂料)和含有化学成分的其他材料，控制泄漏、遗洒挥发。
(2)对油料、油漆、稀料、冷底子油、模板油、脱模剂、压缩气体、液化气体：易燃液体、易爆固体、自燃物品、氧化剂、有机过氧化物等材料严格进行采购、运输、存放、发放和使用控制管理。
(3)如发生大面积的遗洒、燃烧、爆炸等事故，按照《应急准备与响应程序》的预案实施应急处理。
7、施工现场环保工作管理细则
8、施工过程做到落地清减少废弃物的产生。
9、对废弃物进行分类收集、区别处置的方法。固体废弃物应严格分类，按划分的相应贮存区域和贮存方式，整齐合理堆放，并有明确标识。
10、有毒、有害废弃物单独放置在密闭容器或对其进行全封闭，并注明“有害”字样。
11、木材等木作工程现场可再次利用的无毒无害废弃物，可就地回收使用；钢筋、包装容器等木作工程现场不能再次利用的可回收无毒无害废弃物，应向项目部报批后处理。
12、可回收有毒有害废弃物，项目部报批后处理。如废油桶、废塑料布、废灭火器等向公司经项目部处理并有记录。
13、对不可回收利用的无毒无害废弃物，项目部处理。
14、对不可回收利用的有毒有害废弃物，应根据国家法规，采用密闭容器存放，防止二次污染。
15、生活废弃物经由项目部和清运处置单位协商后进行处理。
pcr防止污染 pcr污染处理方法篇四
夜间施工防污染措施
根据上海市环保管理条例，结合本工程实际情况，特制定本措施：
项目部应根据施工进度安排无法避免在夜间施工的，应提前向有关部门申报夜间施工的有关手续。夜间施工必须遵照国家及上海市环境管理条例，严禁盲目施工。
经批准后的夜间施工，我单位必须事先向周边社区告示夜间施工情况和降低噪声措施，按规定减少噪声排放，而且不得将强光照明灯直接照射居民窗户。特殊情况夜间作业，尽量采取降噪措施，事先做好周围群众的工作。为了降低夜间施工中噪声对环境的影响，采用如下措施：
（1）、人为噪声的控制措施
施工现场提倡文明施工，建立健全控制人为噪声的管理制度。尽量减少人为的大声喧哗，增强全体施工人员防噪声扰民的自觉意识。通过统筹安排，合理计划，最大限度地减少深夜高噪音施工的时间和次数；教育工人在砼振捣时不得用振动器长时间振动钢筋； 车辆进出现场，专人指挥，不鸣笛等。
(2)、强噪声机械的降噪措施
非夜间连续施工工序必须的施工机具一律停止使用，减少因施工现场加工制作产生的噪声。尽量选用低噪声设备有消声降噪设备的施工机械。
浙江宝业建设集团有限公司
花木老街改造工程项目部
2013.3.12
pcr防止污染 pcr污染处理方法篇五
【分享】pcr污染与对策
pcr污染与对策
pcr反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.污染原因
(一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染.(二)pcr试剂的污染:主要是由于在pcr试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被pcr核酸模板污染.(三)pcr扩增产物污染.这是pcr反应中最主要最常见的污染问题.因为pcr产物拷贝量大(一般为1013拷贝/ml)，远远高于pcr检测数个拷贝的极限，所以极微量的pcr产物污染，就可造成假阳就可形成假阳性.还有一种容易忽视，最可能造成pcr产物污染的形式是气溶胶污染；在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染.据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，因而由其造成的污染是一个值得特别重视的问题.(四)实验室中克隆质粒的污染:在分子生物学实验室及某些用克隆质粒做阳性对照的检验室，这个问题也比较常见.因为克隆质粒在单位容积内含量相当高，另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂，而且在活细胞内的质粒，由于活细胞的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力.其污染可能性也很大.污染的监测
一个好的实验室，要时刻注意污染的监测，考虑有无污染是什么原因造成的污染，以 便采取措施，防止和消除污染.对照试验
1.阳性对照:在建立pcr反应实验室及一般的检验单位都应设有pcr阳性对照，它是pcr 反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志.阳性 对照要选择扩增度中等、重复性好，经各种鉴定是该产物的标本，如以重组质粒为阳 性对照，其含量宜低不宜高(100个拷贝以下).但阳性对照尤其是重组质粒及高浓度阳 性标本，其对检测或扩增样品污染的可能性很大.因而当某一pcr试剂经自己使用稳 定，检验人员心中有数时，在以后的实验中可免设阳性对照.2.阴性对照:每次pcr实验务必做阴性对照.它包括①标本对照:被检的标本是血清就用 鉴定后的正常血清作对照;被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞作对照.②试剂 对照:在pcr试剂中不加模板dna或rna，进行pcr扩增，以监测试剂是否污染.3.重复性试验
4.选择不同区域的引物进行pcr扩增 防止污染的方法 一． 污染的预防
进行pcr操作时，操作人员应该严格遵守一些操作规程，最大程度地降低可能出现的pcr污染或杜绝污染的出现。
（一）划分操作区：目前，普通pcr尚不能做到单人单管，实现完全闭管操作，但无论是否能够达到单人单管，均要求实验操作在三个不同的区域内进行，pcr的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行： 1.标本处理区，包括扩增摸板的制备； 扩增区，包括反应液的配制和pcr扩增；
3.产物分析区，凝胶电泳分析，产物拍照及重组克隆的制备。
各工作区要有一定的隔离，操作器材专用，要有一定的方向性。如：标本制备→pcr扩增→产物分析→产物处理。
切记：产物分析区的产物及器材不要拿到其他两个工作区。
（二）分装试剂：pcr扩增所需要的试剂均应在装有紫外灯的超净工作台或负压工作台配制和分装。所有的加样器和吸头需固定放于其中，不能用来吸取扩增后的dna和其他来源的dna： 1． pcr用水应为高压的双蒸水；
2． 引物和dntp用高压的双蒸水在无pcr扩增产物区配制；
3． 引物和dntp应分装储存，分装时应标明时间，以备发生污染时查找原因。
(三)实验操作注意事项 尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因之一。因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意： 1.戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套；
2.使用一次性吸头，严禁与pcr产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染；
3.避免反应液飞溅，打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面；
4.操作多份样品时，制备反应混合液，先将dntp、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的精确度； 5.最后加入反应模板，加入后盖紧反应管； 6.操作时设立阴阳性对照和空白对照，即可验证pcr反应的可靠性，又可以协助判断扩增系统的可信性； 7.尽可能用可替换或可高压处理的加样器，由于加样器最容易受产物气溶胶或标本dna的污染，最好使用可替换或高压处理的加样器。如没有这种特殊的加样器，至少pcr操作过程中加样器应该专用，不能交叉使用，尤其是pcr产物分析所用加样器不能拿到其它两个区； 8.重复实验，验证结果，慎下结论。二． 追踪污染源
如果不慎发生污染情况，应从下面几条出发，逐一分析，排除污染。
（一）设立阴阳性对照：有利于监测反应体系各成分的污染情况。选择阳性对照时，应选择扩增弱，且重复性好的样品，因强阳性对照可产生大量不必要的扩增序列，反而可能成为潜在的污染源。如果以含靶序列的重组质粒为对照，100个拷贝之内的靶序列就足以产生阳性扩增。阴性对照的选择亦要慎重，因为pcr敏感性极高，可以从其它方法（sourthern 印迹或点杂交等）检测阴性的标本中检测出极微量的靶分子。此外，每次扩增均应包括pcr体系中各试剂的时机对照，即包括pcr反应所需的全部成分，而不加模板dna，这对监测试剂中pcr产物残留污染是非常有益的。如果扩增结果中试剂对照为阳性结果，就是某一种或数种试剂被污染了。此时，要全部更换一批新的试剂进行扩增，扩增时设立不同的反应管，每一管含有一种被检测试剂，在检出污染试剂后，应马上处理。
（二）环境污染：在排除试剂污染的可能性外，更换试剂后，若不久又发现试剂被污染了，如果预防措施比较严密，则考虑可能为环境污染。环境污染中常见的污染源主要有： 1.模板提取时真空抽干装置； 2.凝胶电泳加样器； 3.电泳装置； 4.紫外分析仪；
5.切胶用刀或手术刀片； 6.离心机；
7.冰箱门把手，冷冻架，门把手或实验台面等；
此时可用擦拭实验来查找可疑污染源。1）用无菌水浸泡过的灭菌棉签擦拭可疑污染源；2）0.1ml去离子水浸泡；3）取5ml做pcr实验；4）电泳检测结果。
8.气溶胶。如果经过上述追踪实验，仍不能查找到确切污染源，则污染可能是由空气中pcr产物的气溶胶造成的，此时就应该更换实验场所，若条件不允许，则重新设计新的引物（与原引物无相关性）。三．污染处理
（一）环境污染
1.稀酸处理法：对可疑器具用1mol/l盐酸擦拭或浸泡，使残余dna脱嘌呤；
2.紫外照射（uv）法：紫外波长（nm）一般选择254/300nm，照射30min即可。需要注意的是，选择uv作为消除残留pcr产物污染时，要考虑pcr产物的长度与产物序列中碱基的分布，uv照射仅对500bp以上长片段有效，对短片段效果不大。uv照射时，pcr产物中嘧啶碱基会形成二聚体，这些二聚体可使延伸终止，但并不是dna链中所有嘧啶均能形成二聚体，且uv照射还可使二聚体断裂。形成二聚体的程度取决于uv波长，嘧啶二聚体的类型及与二聚体位点相邻核苷酸的序列。在受照射的长dna链上，形成二聚体缺陷的数量少于0.065/碱基，其他非二聚体的光照损伤（如环丁烷型嘧啶复合体，胸腺嘧啶乙二醇，dna链间与链内的交联和dna断裂等）均可终止taq dna聚合酶的延伸。这些位点的数量与二聚体位点相当。如果这些位点（0.13/碱基）在dna分子上随机分布，一个500bp片段的dna分子链上将有32处损伤位点，那么，105个这样的分子中每个分子中会至少有一处损伤。相反，如果100bp的片段，每条链上仅有6处损伤，105个拷贝分子中将有许多分子没有任何损伤。这就是uv照射有一定的片段长度限制的原因。
（二）反应液污染
可采用下列方法之一处理：
i法：pcr混合液（未加模板和taq聚合酶）加入0.5u dnase i，室温反应30 min后加热灭活，然后加入模板和taq聚合酶进行正常pcr扩增。该方法的优点是不需要知道污染dna的序列；
2.内切酶法：选择识别4个碱基的内切酶（如msp i和taq i等），可同时选择几种，以克服用一种酶只能识别特定序列的缺陷，室温作用1h 后加热灭活进行pcr；
3.紫外照射法：未加模板和taq聚合酶的pcr混合液进行紫外照射，注意事项与方法同上述uv照射法； 4.g射线辐射法：1.5kgy的辐射可完全破坏0.1ng基因组dna，2.0 kgy可破坏104拷贝的质粒分子，4.0 kgy仍不影响pcr，但高于此限度会使pcr扩增效率下降。引物可受照射而不影响pcr，g射线是通过水的离子化产生自由基来破坏dna的。
（三）尿嘧啶糖苷酶（ung）法
由于uv照射的去污染作用对500bp以下的片段效果不好，而临床用于检测的pcr扩增片段通常为300bp左右，因此ung的预防作用日益受到重视和肯定。
1.原理：在pcr产物或引物中用du 代替dt。这种du化的pcr产物与ung一起孵育，因udg可裂解尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架间的n-糖基键，可除去du而阻止taqdna聚合酶的延伸，从而失去被再扩增的能力。ung对不含du的模板无任何影响。ung可从单或双链dna中消除尿嘧啶，而对rna中的尿嘧啶和单一尿嘧啶分子则无任何作用。
法：用dutp代替dttp，使产物中掺入大量du。在再次进行pcr扩增前，用ung处理pcr混合液即可消除pcr产物的残留污染。由于ung在pcr循环中的变性一步便可被灭活，因此不会影响含du的新的pcr产物。
引物法：合成引物时以du 代dt，这样pcr产物中仅5%u2ca端带du。ung处理后，引物失去了结合位点而不能扩增。对长片段（1-2kb以上）的扩增用dutp法效率较用dttp低，而用du法就可克服这一缺点。du引物最好将du设计在3%u2ca端或近%u2ca端。该法仅能用于引物以外试剂的处理。
4.优点：可以去除任何来源的污染；ung处理可以和pcr扩增在同一个反应管内进行；由于扩增产物中有大量du存在，可彻底消除污染源。
5.需注意的是掺入dutp的dna不应对产物的任何操作有影响，在进行pcr产物克隆时，应该转化ung-（ung缺陷）大肠杆菌受体菌，否则转化产物会被受体菌ung消化掉。
（四）固相捕获法
用于去除标本中污染的核酸和杂质，原理如下：1）用一生物素标记的单链rna探针与待扩核酸杂交，杂交区域是非扩增区；2）用包被链霉亲和素的固相载体来捕获带有生物素探针的杂交核酸，通过漂洗可去除污染的扩增产物和杂质；3）洗脱靶分子后用特异引物扩增非rna探针杂交区域。第2）步的漂洗后可用pcr检测以确定标本是否被扩增产物或重组质粒污染。
（五）rs-pcr法（rna-specific pcr）
也称为链特异性pcr，主要指用于rna模板的特异性pcr法，该法可明显降低假阳性而不影响pcr的敏感性。其关键在于设计引物，逆转录引物的3%u2ca端（a区）有2 0个核苷酸左右为模板的特异性互不序列，5%u2ca端2 0个核苷酸（c区）为附加修饰碱基。与mrna逆转录后，经超速离心使 cdna与多余引物分开，再用和第二引物（c）以第一链cdna为模板合成第二链cdna，以后的pcr循环中用逆转录引物的b区和引物c进行扩增加尾cdna，而污染的dna或质粒dna才不会被扩增。
（六）抗污染引物法
该对引物扩增时通过病毒dna克隆如入质粒的位点。这一区域只存在完整的原病毒中，在重组质粒中，这一区域分成两个区域与克隆位点被。如果重组质粒污染了标本，也不能扩增出任何条带，即使出现了扩增带，其大小也与预期的不同。只有原病毒dna才能被引物扩增，因此只要出现预期大小的扩增带就可以证明标本是阳性的，该法试用于环状靶分子系列。
四．其它pcr检测方法：
（一）两步法：是指在用套式pcr方法扩增某些含量低微的标本时，两对引物在同一个管中以简化步骤，减少污染。通常第一步进行20-25个循环，扩增外引物片段；第二步再进行10个循环，扩增内引物片段。两步法对内外引物的tm值有特殊要求，即内外引物的退火温度高（如68℃），在此温度下内引物不与模板退火，然后降低退火温度（至55℃）再扩增内引物片段，这样，在操作过程中，仅打开pcr反应管一次，大大减少了污染的可能性。
（二）荧光法：亦称荧光pcr技术（fluoresence pcr, f-pcr），是1995年由美国pe公司首先研制成功的，它融汇了pcr的灵敏性、dna杂交的特异性和光谱技术精确定量的优点，电脑同步跟踪，数据自动化处理，直接探测pcr过程中的变化以获得定量的结果，不需要做pcr后处理或检测，完全闭管操作。探针标记除用tet和fam外，还可用hex、joe作为报告荧光，3′端的淬灭基团常用tamra。在探针保持完整时，荧光报告基团的荧光被荧光抑制基团淬灭，而在探针被切断后，荧光报告基团才发出报告荧光，且荧光的强度与pcr产物的数量呈正比。荧光检测仪器透过pcr管壁能直接检测到荧光信号的波长和长度变化。
主要有以下优点：
1.探针特异性强，假阳性率低； 2.操作快速，不需要pcr后处理；
3.定量范围宽，hbv 0.4fg-4000fg/ml(102-106 dane′s particle/ml)； 4.闭管操作，pcr产物污染少； 5.灵敏度高。主要方法有： 1..荧光探针法：进行荧光pcr检测时，要求荧光探针必须完全与靶基因互补，长度以20-30个碱基为宜，必要时3′端磷酸化封闭，以防在扩增时作为引物延伸。该方法利用taq酶的3′→5′聚合酶活性及5′→3′外切酶活性，可以在链延伸过程中实现链替换，并将被替换的探针切断，故可进行定性与定量检测。
荧光探针5′端标记的tamra，在480nm激发下产生530nm的红色荧光；3′端标记的fam，激发后产生绿色荧光。pe公司推出的taqman系统，即采用双荧光探针，如配合使用pcr扩增与荧光检测合二为一的仪器，可进行实时（real-time）定量检测。2．分子信标法：分子信标（molecular beacon）是一个发夹样结构的特异探针，其环状部分与靶序列互补。在室温时，分子信标的发夹紧闭，荧光淬灭。pcr扩增时，随着温度升高，发夹松开，与单链模板特异结合，发出荧光。荧光强度与模板呈正比，故可用于pcr产物的定性及定量。
