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生物技术检测方案篇一
1、掌握碱变性提取法提取大肠杆菌中质粒dna的原理和方法。
2、学习并掌握凝胶电泳进行dna的分离纯化的实验原理。
3、学习并掌握凝胶的制备及电泳方法。
4、学习并掌握凝胶中dna的分离纯化方法。
1、质粒dna的制备方法
质粒（plasmid）是独立存在于染色体外、能自主复制并能稳定遗传的一种环状双链dna分子，分布于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，但在细菌细胞中含量最多。细菌质粒大小介于1～200kb之间，是应用最多的质粒类群，在细菌细胞内它们利用宿主细胞的复制机构合成质粒自身的dna。
质粒dna的制备包括3个步骤：①培养细菌，使质粒dna大量扩增；②收集和裂解细菌；③分离和纯化质粒dna。主要方法包括：碱裂解法：0。2molnaoh+1%sds；煮沸裂解法：沸水煮沸40秒；sds裂解法：10%sds，一般用于质粒大量提取。在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒dna的用途进行选择。本实验选择碱裂解法提取质粒dna。
2、质粒dna的提取——碱变性提取法
dna的同时，也伴随着rna沉淀，可利用rnasea将rna降解。质粒dna溶液中的rnasea以及一些可溶性蛋白，可通过酚/氯仿抽提除去，最后获得纯度较高的质粒dna。
3、凝胶电泳进行dna分离纯化
电泳（electrophoresis）是带电物质在电场中向着与其电荷相反的电极方向移动的现象。各种生物大分子在一定ph条件下，可以解离成带电荷的离子，在电场中会向相反的电极移动。凝胶是支持电泳介质，它具有分子筛效应。含有电解液的凝胶在电场中，其中的电离子会发生移动，移动的速度可因电离子的大小形态及电荷量的不同而有差异。利用移动速度差异，就可以区别各种大小不同的分子。因而，凝胶电泳可用于分离、鉴定和纯化dna的片段，是分子生物学的核心技术之一。
凝胶电泳技术操作简单而迅速，分辨率高，分辨范围广。此外，凝胶中dna的位置可以用低浓度荧光插入染料如溴化乙锭（ethidium bromide，eb）或sybr gold染色直接观察到，甚至含量少至20pg的双链dna在紫外激发下也能直接检测到。需要的话，这些分离的dna条带可以从凝胶中回收，用于各种各样目的的实验。
分子生物学中，常用的两种凝胶为琼脂糖（agarose）和聚丙烯酰胺凝胶。这两种凝胶能灌制成各种形状、大小和孔径，也能以许多不同的构型和方位进行电泳。聚丙烯酰胺凝胶分辨率高，使用于较小分子核酸（5—500bp）的分离和蛋白质电泳。它的分辨率非常高，长度上相差1bp或质量上相差0。1%的dna都可以彼此分离，这也是采用聚丙烯酰胺凝胶电泳进行dna序列分析的分子基础。虽然它能很快地进行电泳，并能容纳较大的dna上样量，但是与琼脂糖凝胶相比，在制备和操作上繁琐。琼脂糖是从海藻中提取的长链状多聚物，由β—d—吡喃半乳糖与3，6—脱水—l—吡喃半乳糖组成，相对分子质量为104—105。琼脂糖加热至90℃左右，即可溶化形成清亮、透明的液体，浇在模版上冷却后形成凝胶，其凝固点为40—45℃。琼脂糖凝胶相对于聚丙烯酰胺凝胶分辨率低，但它的分离范围更大（50至百万bp），小片段dna（50—20000bp）最适合在恒定轻度和方向的电场中水平方向的琼脂糖凝胶内电泳分离。琼脂糖凝胶电泳易于操作，适用于核酸电泳，测定dna的相对分子质量，分离经限制酶水解的dna的片段，进一步纯化dna等。
琼脂糖凝胶电泳是一种常用的方法。在溶液中，由于核酸有磷酸基而带有负电荷，在电场中向正极移动。dna在琼脂糖凝胶中的电泳迁移率主要取决于6个因素：样品dna分子的大小、dna分子的构象、琼脂糖浓度、电泳所用电场、缓冲液和温度。
1、实验仪器
培养皿、接种环、三角瓶、酒精灯、恒温振荡培养箱、50ml离心管、1。5ml塑料离心管（eppendorf管）、高速离心机、漩涡振荡器、微量移液器、不同型号枪头、天平、制胶槽、梳子、电泳仪、吸管、量筒、微波炉、灭菌锅、恒温水浴锅、试剂瓶、卫生纸和记号笔、手套等。
2、实验试剂
lb培养基，抗生素ap（氨苄青霉素），溶液ⅰ，溶液ⅱ，溶液ⅲ，rnasea母液，te缓冲液，饱和酚，氯仿/异戊醇混合液，酚/氯仿/异戊醇（pci）混合液，预冷无水乙醇，tae电泳缓冲液（10×），上样缓冲液（6×），琼脂糖，溴化乙锭（eb），dna相对分子质量标准物dna marker λ/hind ⅲ，5mol/l ph 5。2的醋酸钠。
1、准备实验
配制lb液体培养基，分装到100ml的三角瓶中20ml，300ml的三角瓶中50ml，另配lb固体培养基；准备1000ul、200ul、10ul移液枪尖各一盒，1。5ml离心管若干于500ml三角瓶中，50ml离心管2个 ，将上述物品包好连同配好的培养基一同灭菌。
2、菌体培养
（100ug/ml），质粒puc19具有ap抗性基因，使得带有puc19的质粒得以生长。 过夜培养后菌体量大，杂质较多，然后用移液枪吸取过夜培养物2ml转接于50mllb液体培养基中，培养基中加入ap250ul，37℃振荡培养4—6h至对数生长期后期，生长速率快，代谢旺盛，酶系活跃，杂质少，适合提取质粒。
3、质粒提取
（1）称量空的50ml离心管的重量为14。331g，然后将三角瓶中的菌液倒至管中，不能倒满，液面距管口约1cm，7000rpm离心5分钟后弃去上清液，收集菌体细胞。
（2）向离心管中悬滴加入5ml冰预冷的溶液ⅰ打散菌体洗涤，用漩涡振荡器使之充分悬浮后用枪尖吹吸混匀，同步骤（1）离心，弃去上清，将离心管倒置于吸水纸上，使上清液全部流尽干燥，然后称重得14。437g，则菌体质量为106mg。
溶液密度增加，悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部；维持渗透压，防止细胞提前破裂，防止dna受机械剪切力作用而降解。edta是ca2+和mg2+等二价金属离子的螯合剂，可抑制dnase的活性，抑制微生物的生长。tris—cl溶液提供适当的ph。
（4） 按比例加入新配制的溶液ⅱ2ml（与溶液ⅰ对应），轻加轻摇，冰浴5min。溶液变清亮透明粘稠如蛋清状。溶液ⅱ中的naoh使细胞膜发生了从bilayer（双层膜）结构向micelle（微囊）结构的相变化导致细胞溶解。同时，强碱性使染色体dna、质粒dna和蛋白质变性；sds为下一步沉淀做铺垫。
（5）按比例加入冰预冷的溶液ⅲ1。5ml（与溶液ⅰ、ⅱ对应），轻加轻摇，冰浴10min。溶液出现白色絮状沉淀。沉淀为蛋白质sds复合物、细胞碎片和其他大分子成分。溶液ⅲ中的hac中和naoh，因为长时间的碱性条件会打断基因组dna，只要是50－100 kb大小的片断，就不能再被pds共沉淀。同时变性的质粒dna复性。反应形成的高盐环境进一步加速了沉淀。
（6）12000rpm离心15min，白色沉淀聚集在离心管一侧，用移液枪将上清液转移到另一洁净的离心管中。然后向上清液中加入1/10体积的3mnaac混匀，加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对dna很安全，因此是理想的沉淀剂。 dna溶液是dna以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去dna周围的水分子，使dna失水而易于聚合。在ph为8左右的溶液中，dna分子是带负电荷的，加一定浓度的naac或nacl，易于互相聚合而形成dna钠盐沉淀。
（7） 以12000rpm离心15min，小心倒去上清液，得到dna沉淀。加入3ml70%冰乙醇，轻轻地覆盖沉淀，不打散沉淀，洗涤一次。
（8）以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。去掉上清液，将离心管上沉淀部位做好标记，将离心管倒置于吸水纸上，干燥5min。粗提取的质粒呈浅黄色，随着水分的减少质粒变为无色。所以为了完全溶解质粒，要在离心管上标记质粒所在位置。
（9）将dna沉淀溶于1mlte缓冲液中，移液枪吹吸助溶，然后将溶解液转移到一个eppendorf管中。te是ph缓冲液，为dna提供稳定的生理状态，呈弱碱性，有利于保护碱基对。同时含有edta是二价阳离子的螯合剂，抑制dna酶作用。
4、质粒纯化
酚加入后，溶液分层，苯酚向下，下层呈浅黄色，上层溶液无色，在中间产生大量白色沉淀，此为变性后的蛋白质。
（3）加入等体积的（500ul）苯酚/氯仿溶液（1：1），振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到到另一洁净的eppendorf管中。苯酚是强的蛋白变性剂，但是苯酚留在质粒溶液中会影响dna的酶切，它本身易被氧化，会损伤质粒。氯仿也是蛋白变性剂，但是比酚弱，且能溶解质粒中的脂类，溶解苯酚，去除溶液中的苯酚。异戊醇则可起消除抽提过程中出现的泡沫，有利于分层更明显。此时溶液中已看不到明显的白色沉淀，但仍有蛋白质的存在。
（4）加入等体积的氯仿溶液，振荡混匀， 7000rpm，离心5min，上清液转移到一洁净的eppendorf管中，得上清液400ul。
（5）向上清液中加入1/10体积的naac混匀，再加入2倍体积的冰无水乙醇，混匀，—20℃下沉降30分钟。
（6）以12000rpm，离心15min，弃去上清液，得到dna沉淀，为白色。
（7）向dna沉淀中加入70%冰乙醇200ul，不打散沉淀，洗涤。然后以12000rpm离心5min，离心管底部dna沉淀所在面应与收集沉淀面一致。
（8）去掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，室温干燥。用50ulte溶解于1管中。
5、质粒检测
（1）称取0。4g的琼脂糖，置于一锥形瓶中，在三角瓶上标好液面位置，加入40ml的1×tae电泳缓冲液，再加入5—10ml重蒸水，以补充在溶胶过程中损失的水分。然后置微波炉加热至完全溶化，溶液透明。冷却至50℃左右，倒入制板槽制板。
（2）待胶凝固后，小心拔起梳子，使加样孔端置阴极段放进电泳槽内。在槽内加入1×tae 电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面2—3cm。取1μl加电泳载样液和3μl质粒样品于小纸片上，用移液枪混匀。
（3）电泳1h，观察溴酚兰的带（蓝色）的移动。
（4） 把胶槽取出，小心滑出胶块，放进eb溶液中进行染色，完全浸泡约5min。
（5）凝胶成像仪观察。
（1）滴加溶液ii时，要逐滴加入，且要轻加轻摇溶液使之混匀，整体动作要快，因为强碱在溶液中停留时间不能过长，否则会破坏质粒dna。
（2）加入溶液iii后，生成了大量的絮状沉淀，溶液iii中和强碱使质粒复性，不可剧烈震荡， 防止染色体dna断裂，应该上下颠倒离心管，使其混匀。
生物技术检测方案篇二
显微镜、洋葱表皮细胞切片，及其他细胞装片。
1、右手握住镜臂，左手托住镜座，把显微镜向着光放在实验台上。
2、对光：转动转换器，使低倍物镜对准通光孔。
3、调节载物台下的反光镜，从目镜往下看，能看见亮的光圈。
4、观察：调节粗准焦螺旋，把所要观察的洋葱表皮切片放在载物台上，用压片夹夹住，标本要正对通光孔的中央。
5、左眼向目镜内看，同时转动粗准焦螺旋等，直到看清切片上的细胞为止，最后整理器材。
1、取送显微镜时，应右手握住镜臂,左手托住镜座，轻拿轻放。
2、镜检时，坐姿端正，一般用左眼观察物象，用右眼看着实验报告纸画图。两眼须同时睁开。
3、切忌一面从目镜进行观察，一面使镜筒下降，这样容易使物镜与玻片标本碰撞而损坏。
4、在高倍镜下调节焦距时，切勿使用粗调节器，以免压坏标本，损坏物镜。
5、显微镜使用完毕必须先上升镜筒，移开镜头后再取出玻片标本，以免取玻片时擦损镜头的镜面。
利用教学显微镜观察洋葱表皮细胞。
在实验过程中为学生提供多种细胞装片，以供学生操作、观察，增加了学生动手实验的时间，使学生在实验中经历调节显微镜的焦距的过程，从而熟练掌握教学教学显微镜的使用方法。
生物技术检测方案篇三
为确保文物单位消防安全大检查工作扎实有效开展，根据文物保护与消防安全法律、法规，特制定本实施方案。
全面贯彻文物保护和消防安全法律法规，认真落实“预防为主、防消结合”的方针，通过文物部门和公安机关密切配合，强化消防安全监管，进一步督促文物单位严格落实消防安全责任制，提高消防安全管理水平，增强责任主体意识和防控火灾的能力，有效预防和减少火灾事故发生，确保国家文化遗产安全。
xxx年x月xx日--xx年xx月xx日
本次检查的文物单位包括：各级文物保护单位（重点是古建筑、近现代代表性建筑、石窟寺），博物馆、纪念馆等文物收藏单位，文物考古研究所，文物保护工程施工现场等。
《中华人民共和国文物保护法》；
《中华人民共和国文物保护法实施条例》；
《中华人民共和国消防法》；
公安部《机关、团体、企业、事业单位消防安全管理规定》；
《国家文物局突发事件应急工作管理办法》；
国家旅游局、国家工商行政管理总局、国家质量监督检验检疫总局、国家宗教事务局、国家文物局、国家标准化管理委员会《关于进一步规范全国宗教旅游场所燃香活动的意见》。
（一）消防安全工作的组织领导和岗位职责情况
3、是否明确岗位职责，层层落实消防安全责任制，签订责任书。
（二）消防安全管理制度、消防安全档案建立情况
1、是否建立下列消防安全管理制度：
消防安全教育、培训
防火巡查、检查；
消防（控制室）值班；
消防设施、器材维护；
火灾隐患整改；
用火、用电安全管理；
专职和兼职消防队的管理；
火灾应急预案演练；
燃气和电气设备的检查和管理（包括防雷、防静电）；
消防安全工作考评和奖惩等。
2、是否按规定建立消防档案，消防档案是否完整、规范。
（三）消防设施设备及其使用情况
1、是否按相关要求安装火灾报警和灭火设施、设备；
2、是否按相关要求配备消防器材；
3、消防安全标志的设置和完好、有效情况；
4、消防水源、消火栓等设施建设和使用情况；
5、是否设立必要的消防通道；
6、消防设施设备是否进行日常维护保养，确保完好有效；
7、消防控制室值班和设施运行情况。
8、职工对消防知识的掌握，对消防设施、设备、器材的操作使用情况。
（四）消防安全预案的制定和演练情况
1、消防安全预案是否科学、有效，具有可操作性；
2、是否定期组织消防演练。
（五）消防安全检查和火灾隐患整改情况
1、日常防火巡查、定期防火检查和抽查情况；
2、对火灾隐患是否立即整改，不能立即整改的是否采取了有效措施，限期整改。
3、文物保护单位是否被用于生产、经营或者娱乐场所；
4、古建筑之间或毗连古建筑是否存在私搭乱建情况；
5、古建筑保护范围内是否存放易燃易爆物品及柴草、木料等可燃物品。
（六）用火用电管理情况
2、公布为文物保护单位的寺庙宫观是否按相关规定和要求，规范燃香活动。
3、古建筑内电气线路、设备安装敷设是否规范，是否定期检测。
（七）其他文物单位消防安全工作情况。
消防安全检查主要采取各文物单位自查自改、地方各级文物行政部门与公安机关联合检查、国家文物局与公安部重点抽查的形式组织实施。
(一)自查自改
由各文物单位对本单位消防安全状况进行全面自查，分析查找消防安全隐患，针对消防安全隐患，认真组织进行整改，并及时将自查及整改情况报当地文物行政主管部门。
在文物单位消防安全集中检查期间各文物单位要至少开展一次消防安全教育培训，组织进行一次消防安全演练。消防安全自查、消防安全演练和消防安全教育培训要做好书面记录备查。
(二)联合检查
由县级以上文物行政主管部门与公安机关联合组成文物单位消防安全检查组，对本行政区域内文物单位实施联合检查。对重大文物火灾隐患和消防安全管理存在的的重大问题向当地政府报告或通报，并作为文物消防安全隐患整改重点督办单位进行跟踪督办。
（三）汇总上报
检查工作结束后，由省、自治区、直辖市文物行政主管部门与公安机关对本辖区内文物单位消防安全检查工作情况进行汇总分析，形成检查报告，并于20xx年3月15日前分别以书面形式报国家文物局和公安部。
省级文物行政主管部门要对本辖区内被公安机关确定为重大火灾隐患单位的全国重点文物保护单位和重点博物馆进行统计，填写《文物系统重大火灾隐患单位统计表》（见附件），随检查报告一并报国家文物局。
(四)重点抽查
国家文物局与公安部联合组成检查组，适时对全国各地文物单位消防安全大检查工作落实情况和重点文物单位消防安全防范情况进行抽查，并将对各地工作开展情况进行通报。
（一）切实提高认识，加强组织领导
预防和减少文物单位火灾事故发生，确保国家文化遗产安全，是各级文物行政部门和公安机关的重要职责。各地要充分认识当前做好文物单位消防安全检查工作的重要性，切实增强责任感、使命感和紧迫感，成立文物单位消防安全联合检查工作机构，制定详细、周密、具体的检查工作计划和措施，切实做到责任到人，检查到位，务求实效。
（二）加大整改力度、确保取得实效
通过本次检查要切实摸清文物单位消防安全的底数，督促文物单位严格落实消防安全主体责任，成立消防安全组织，明确消防安全责任人和消防安全管理人，建立健全各项消防安全管理制度，加强消防基础设施建设。对发现的火灾隐患，要研究制定科学的整改方案，采取有效措施，加大工作力度，坚决依法督促整改，切实提高文物单位的火灾防范能力，有效遏制火灾事故的发生。
（三）加强协同配合，形成长效机制
各级文物行政主管部门和公安机关要在当地政府的统一领导下，密切协作，各司其职，依法履行职责，把文物单位消防安全纳入工作内容，及时组织研究，解决突出问题，并形成良好的工作管理机制。
20xx年文物局消防安全检查实施方案
生物技术检测方案篇四
（1）了解培养基的配置原理和方法，掌握分离培养微生物的有关准备工作。
（2）掌握高压灭菌方法及原理
（1）培养基的制备原理：
培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。
从营养角度分析：
营养：碳源、氮源、能源、生长素、水分和无机盐等；?适宜的酸碱度(ph值)和一定缓冲能力；?一定的氧化还原电位；?合适的渗透压。
琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固，不容易被微生物污染。但多次反复融化，其凝固性降低。
（2）湿热灭菌原理－高压蒸汽灭菌
度也随之增加。在的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。
实验材料与方法
配制培养基所需器材
实验设备：高压蒸汽灭菌器。
称量纸、药勺、500ml、100ml量筒、牛皮纸、硫酸纸、橡皮筋、铁丝筐、平皿、剪刀等。
培养基等集中放讲台前高压桶内，送到洗刷室统一高压灭菌条件及注意事项
高压灭菌条件：℃，15min。含糖培养基113℃，15min。
倒平板电炉加热灭菌好的培养基打开平皿包装倒平板（10块）注意事项：空气环境无菌（应在酒精灯火焰周围无菌区）。
a.在酒精灯火焰处，倾斜打开瓶口。
b.瓶口要过火焰。
c.左手掀开平皿小口。
d.倾注满皿底再多一点，约10ml（7cm直径平皿）。
e.推放一边要轻缓，不能晃起琼脂挂壁，易在培养过程中污染杂菌。
f.完全凝固再翻转平板放塑料筐内，4℃备用。
（1）如何证明培养基灭菌是否彻底?
把灭菌后的培养基按灭菌锅内的不同位置，每处抽取数管(瓶)，标上记号，置25℃～30℃培养一周左右进行检查。如果培养基没有什么变化，说明灭菌效果良好；如果某一位置的培养基出现了杂菌菌落，可能是摆放的太紧，导致蒸汽不畅，或锅的结构不合理等原因所致，应根据上述情况进行改进；如果大部分或全部菌种瓶都出现杂菌，说明灭菌温度或灭菌时间不够，应提高压力或延长灭菌时间。经过几次检验都证明能彻底灭菌后，以后按同样条件灭菌的则不必进行检查。
经过几次检验都证明能彻底灭菌后,以后按同样条件灭菌的则不必进行检查。
（2）为什么说消毒与灭菌是微生物学和临床医学必不可少的基本知识?由于病原生物广泛存在于自然界，可通过不同途径和媒介进入人体，引起感染或造成疾病流行。因此，杀灭或清除存在于体外传播媒介上的病原生物，对于切断传播途径、预防和控制其感染具有重要意义。自古以来，人们就利用煮沸、火烧、日晒等方法杀灭或去除微生物，达到预防疾病的目的。实际上，除了在临床医疗实践中需要防止微生物的污染或感染外，在微生物学实验室、食物保存、饮水净化、药品与生物制品生产等过程中都需要避免微生物的污染。
接种是微生物实验及科学研究中一项基本操作技术。根据实验目的和要求，
选择合适的接种工具与接种方法，接种工具有接种环、接种针、接种铲、接种钩、吸管、滴管、棉签等。常用接种方法有：斜面接种，液体接种，穿刺接种，平板接种和固体接种。接种的关键是无菌操作。
接种工具使用前后须经火焰烧灼灭菌，棉塞不能乱放，始终夹在手指中。在培养四大类微生物时应注意选择适宜的培养条件。多数细菌为专性需氧菌与兼性需氧菌，少数为厌氧菌。多数食品腐败菌和工业用菌种，以及人和动物病原菌的最适生长温度为37℃，并且在近中性（～）条件下生长良好。多数放线菌为好氧菌，少数为厌氧菌，最适生长温度为28～30℃，多数适宜在偏碱性环境中生长（～）。
（1）实验材料：实验设备：温箱。
生物技术检测方案篇五
1．还原糖的鉴定原理
生物组织中普遍存在的还原糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。它们的分子内都含有还原性基团（游离醛基或游离酮基），因此叫做还原糖。蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基，因此叫做非还原性糖，不具有还原性。本实验中，用斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定非还原性糖。斐林试剂由质量浓度为／ml的氢氧化钠溶液和质量浓度为／ml的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的cu(oh)2沉淀。cu(oh)2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的cu2o沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。其反应式如下：ch2oh—(choh)4—cho＋2cu(oh)2→ch2oh—(choh)4—cooh＋cu2o↓＋2h2o用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色 棕色 砖红色(沉淀)。
2．蛋白质的鉴定原理
鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂。双缩脲试剂的成分是质量浓度为／ml的氢氧化钠溶液(a)和质量浓度为／ml(b)的硫酸铜溶液。在碱性溶液(naoh)中，双缩脲(h2noc—nh—conh2)能与cu2+作用，形成紫色或紫红色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反应。
3．脂肪的鉴定原理
脂肪可以被苏丹ⅲ染成橘黄色，被苏丹ⅳ染成红色
关于鉴定还原糖的实验，在加热试管中的溶液时，应该用试管夹夹住试管上部，并放入盛开水的大烧杯中加热。注意试管底部不要接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管内溶液沸腾时冲出试管，造成烫伤。如果试管内溶液过于沸腾，可以上提试管夹，使试管底部离开大烧杯中的开水。
2.斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后方可使用，切勿将甲液和乙液分别加入组织样液中。
生物技术检测方案篇六
专业：生物科学类
年级：20xx级
姓名：
学号：1007040085
20xx年xx月xx日
实验十分离产淀粉酶的微生物
1、熟悉常用微生物培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）的配制方法。
2、学习各种无菌操作技术，并用此技术进行为微生物稀释分离、划线分离接种。
3、用平板划线法和稀释涂布平板发分离微生物。
4、认识为微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。
5、掌握分离产淀粉酶微生物的试验方法和步骤，了解产淀粉酶的微生物种类及形态。
1、简单单细胞挑取法
2、平板分离法和稀释涂布平板法
1)稀释后的细胞悬液图不在平板上可以分离得单个菌株
2)在适合于待分离微生物的生长条件（如营养、酸碱度、温度与氧等）下培养微生物，或加入某种_造成只利于待分离微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
3)微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等方法完成。
以淀粉作为惟一碳源的培养基培养未分离细菌，能产淀粉酶的细菌能生长，且菌落周围出现透明圈（淀粉不透明，被消化后变透明），则产淀粉酶微生物被分离出来。本实验采用透明圈检验法检测培养物中是否有产淀粉酶微生物的生长。
1、器材：
培养皿、载玻片、盖玻片、普通光学显微镜、量筒、滴管、吸水纸、烧杯、三角瓶、酒精灯、玻璃棒、接种环、镊子、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、、天平、滤纸、ph试纸等。
2、试剂：
配制牛肉膏蛋白胨培养基的原料（牛肉膏、nacl、琼脂、蛋白胨）、淀粉、卢戈氏碘液、蒸馏水、250ml三角瓶中装90ml无菌水加20粒玻璃珠，作稀释用等。
3、土样：
取自贵州大学农生楼后土壤10g，地下10cm左右。
1、配制牛肉膏蛋白胨培养基：
蛋白胨1%……………………………………4g
…………………………………..2g
琼脂2%……………………………………..8g
ph……………………………………
（2）无菌水的制备
分别取9ml蒸馏水加入5支试管中，加塞后用报纸包扎捆绑，放入高压蒸汽灭菌锅灭菌备用。取90ml蒸馏水加入250ml三角瓶中，同样的操作，灭菌备用。
（3）器皿的准备
将刻度吸管用报纸包扎，培养皿装入专用灭菌杯分别放入高温灭菌箱灭菌备用。
2）倒11个平板和7支试管斜面，包扎，、121℃、灭菌30min.
2、制备土壤稀释液：
称取土样10g，放入盛有250ml无菌水的带有玻璃珠的三角瓶中，振荡摇匀10min使土和水充分混合，然后用移液枪从三角瓶中吸取1ml（此操作要求无菌操作），加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推分别制成制成、、、、不同稀释度的土壤溶液。
3、涂布培养：
、浓度的土壤稀释液作为涂布平板培养的对象，将其分别涂布在3个牛肉膏蛋白胨培养基中，共6个培养基，标号，37°c温箱培养48h。
4、选取目的菌株：
两天后对土壤溶液的微生物培养基进行观察，并取两个菌落形态完全一致的分散的单个菌落，对其中一个喷洒卢戈氏碘液，观察其菌落周围是否出现透明圈，如果出现透明圈说明此菌株产淀粉酶，是目的菌株，记录细菌明显的性状。
